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一种提高重组人胶原蛋白羟化率的方法 

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申请/专利权人:山东美瑞生物技术有限公司

摘要:本发明属于生物技术领域,具体涉及一种提高重组人胶原蛋白羟化率的方法,包括以下步骤:选取全长胶原蛋白核酸序列,连接到含AOX启动子的表达载体,同时构建THI11双启动子表达载体并连接能够编码人羟化酶核酸序列,形成人羟化酶表达载体;将两表达载体共同转化到毕赤酵母中筛选获得可共表达人胶原蛋白和羟化酶的重组表达菌株;对重组表达菌株进行诱导培养,调节两种诱导剂获得高羟化率的重组人胶原蛋白;相比现有技术,本发明实现了人胶原蛋白与羟化酶的独立调控,提高了重组人胶原蛋白中的羟脯氨基酸的占比,获得具有良好稳定性的重组人胶原蛋白。

主权项:1.一种提高重组人胶原蛋白羟化率的方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一、构建重组人胶原蛋白表达质粒;步骤二、构建人羟化酶表达质粒,包括构建新型THI11双启动子载体和连接人羟化酶表达序列;步骤三、将重组人胶原蛋白表达质粒和人羟化酶表达质粒转化到毕赤酵母中并筛选获得能够共表达人胶原蛋白和人羟化酶的重组菌株;步骤四、将重组菌株,用甲醇、维生素B1诱导培养,对获得重组人胶原蛋白进行纯化后,用液相法检测重组人胶原蛋白中脯氨酸、羟脯氨基酸的含量。

全文数据:

权利要求:

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