买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：郑州大学

摘要：一种可原位自组装的工程化杂化膜负载cGAS‑STING通路激活剂纳米体系复合物的制备方法及应用，方法是：取氧化锌纳米粒和拓扑异构酶抑制剂，制备得负载拓扑异构酶抑制剂的氧化锌纳米粒，再制备硫酸软骨素包裹的负载拓扑异构酶抑制剂的氧化锌纳米粒，将工程化大肠杆菌在肉汤中培养，得工程化菌膜，刮取细胞，离心，沉淀，悬于低渗裂解缓冲液中，冰置，匀浆，离心，上清，离心，沉淀，得到细胞膜，将工程化菌膜和细胞膜重悬于PBS中，反复挤出，得工程化杂化膜，与硫酸软骨素包裹的负载表柔比星的氧化锌纳米粒混合，反复挤出，得复合物，原料丰富，易制备，品质好，生物相容性和稳定性好，经济和社会效益显著。

主权项：1.一种可原位自组装的工程化杂化膜负载cGAS-STING通路激活剂纳米体系复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备负载拓扑异构酶抑制剂的氧化锌纳米粒：分别取氧化锌纳米粒和拓扑异构酶抑制剂各5-10mg溶于5-10mL的溶剂中，在室温下搅拌24h，12000rpm离心10min，冻干，得负载拓扑异构酶抑制剂的氧化锌纳米粒；所述的拓扑异构酶抑制剂为表柔比星、阿霉素、柔红霉素或米托蒽醌的一种；所述的溶剂为超纯水、pH=7.4的PBS缓冲液、DMSO或无水乙醇中的一种；（2）制备硫酸软骨素修饰的负载拓扑异构酶抑制剂的氧化锌纳米粒：步骤（1）中的负载拓扑异构酶抑制剂的氧化锌纳米粒5-10mg溶于7-10mL的溶剂中，在剧烈搅拌下缓慢滴加硫酸软骨素溶液，12000rpm离心10min，冻干后即得到硫酸软骨素包裹的负载拓扑异构酶抑制剂的氧化锌纳米粒；所述的硫酸软骨素溶液是称取硫酸软骨素5-10mg溶于8-10mL的溶剂中混匀制成；3制备工程化的大肠杆菌膜：将10μL的工程化的大肠杆菌接种在100mL的LB肉汤培养基中，在37℃，150rpm下培养12-16h，将菌液以6000rpm离心10min，收集沉淀，并重悬于2-4mL超纯水中，用超声波细胞破碎仪以300w超声20min，再用0.22μm的微孔滤膜过滤，液体在15000g离心120min得到工程化的大肠杆菌膜；所述的工程化的大肠杆菌为导入程序性死亡受体1（PD-1）、程序性死亡-配体1（PD-L1）、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4（CTLA-4）或整合素相关蛋白（CD47）质粒的大肠杆菌中的一种；（4）制备工程化杂化膜包裹的cGAS-STING通路激活剂纳米体系复合物：用细胞刮刀刮取细胞，在4℃条件下以800g离心5min收集细胞沉淀，将细胞沉淀重悬于低渗裂解缓冲液中，匀浆后，在冰上放置15min，在4℃下以800g离心5min，收集上清，再在4℃下以14000g离心30min，收集沉淀，得细胞膜，用BCA蛋白定量试剂盒对提取的细胞碎片进行量化，将步骤（3）制备的大肠杆菌膜和细胞膜分别重悬于1mL的PBS缓冲液中，通过脂质挤出器反复挤出13次，即得工程化的杂化膜，将步骤（2）制备的硫酸软骨素包裹的负载拓扑异构酶抑制剂的氧化锌纳米粒与工程化的杂化膜以1：1的质量比混合，用脂质挤出器反复挤出13次，即得到可原位自组装的工程化杂化膜包裹的cGAS-STING通路激活剂纳米体系复合物，粒径为100nm；所述的低渗裂解缓冲液是由20mMTris-HCl、10mMKCl、2mMMgCl2、1mMPMSF混合后加水至1000mL混匀制成；所述的细胞为红细胞、巨噬细胞和癌细胞中的一种。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 郑州大学 一种可原位自组装的工程化杂化膜负载cGAS-STING通路激活剂纳米体系复合物的制备方法及应用