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申请/专利权人:苏州晶睿生物科技有限公司
摘要:本发明公开了一种恒温检测B族链球菌及内参核酸的体系、方法和应用,涉及生物医学领域,本发明中的体系包括扩增CFB基因的引物对CFB‑F1和CFB‑R1及检测CFB基因的探针、扩增ATPD基因的引物对ATPD‑F1和ATPD‑R1及检测ATPD基因的探针、EMA重组酶、EMA聚合酶、MgOAc、EMA缓冲液、RNA转录酶、修饰核酸酶和核酸外切酶Ⅲ;所述内参为枯草芽孢杆菌;所述CFB基因为B族链球菌中的基因;所述ATPD基因为内参核酸中的基因。本发明提供的包含所述体系的试剂盒可以实现aM级别的DNA检测,除了B族链球菌快速定性检测外,也可以实现B族链球菌的早期筛查,因假阴性造成的漏检率极低,且内参与靶标检测不干扰,能够实现单管多个试剂的一步法检测,操作方便,步骤简单。
主权项:1.一种恒温检测B族链球菌及内参核酸的体系,其特征在于:包括扩增CFB基因的引物对CFB-F1和CFB-R1及检测CFB基因的探针、扩增ATPD基因的引物对ATPD-F1和ATPD-R1及检测ATPD基因的探针、EMA重组酶、EMA聚合酶、MgOAc、EMA缓冲液、RNA转录酶、修饰核酸酶和核酸外切酶Ⅲ;所述内参为枯草芽孢杆菌;所述CFB基因为B族链球菌中的基因;所述ATPD基因为内参核酸中的基因;所述引物对CFB-F1、CFB-R1及检测CFB基因的探针分别具有SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示的核苷酸序列;所述引物CFB-F1或CFB-R1的5’端带有RNA聚合酶启动子;所述引物对ATPD-F1和ATPD-R1及检测ATPD基因的探针分别具有SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示的核苷酸序列,其中,检测ATPD基因的探针第32位碱基T标记荧光基团,探针第35位碱基T标记淬灭基团,探针第33位碱基A修饰四氢呋喃。
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