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申请/专利权人：西南林业大学;云南蓝煌农林科技有限公司;云南植虫药生物科技有限公司

摘要：本发明涉及植物组织培养技术领域，具体来说是一种利用丛生芽诱导百子莲多倍体的方法及应用，步骤包括：无菌体系建立、然后对无菌材料进行诱导培养，在进行染色体加倍诱导，然后依次进行形态筛选、生根培养、染色体鉴定，染色体数量大于或等于4n的生根苗即为多倍体材料。本发明采用适宜浓度的秋水仙素进行短时静置诱导，同时再用适宜浓度的安磺灵进行诱导，可将多倍体诱导率提高到48%以上，而死亡率仅为1.4%，继续培养时芽均能正常生长及生根，百子莲进行染色体加倍后，可使百子莲花型变大，花色变深，同时还可使部分品种花瓣以及花萼变宽，更具观赏性。

主权项：1.利用丛生芽诱导百子莲多倍体的方法，其特征在于，步骤包括：（1）外植体选择与清洁；（2）外植体消毒；（3）丛生芽诱导：外植体用无菌纸吸去表面水分，接种于丛生芽诱导培养基中，置于温度25±2℃下暗培养7～10天，后温度不变，每日照光10h，光强2000～3000lx的光暗交替下培养40～50天；所述丛生芽诱导培养基配方为：MS+NAA0.02～0.05mgL+IAA0.01～0.02mgL+ZT0.5～0.8mgL+2-ip0.1～0.2mgL；（4）染色体加倍诱导：诱导出的丛生芽切成单芽，置于诱导液Ⅰ中，在温度25±2℃，无光照的环境下静置浸泡4～6h，后用无菌水冲洗2～3次，再次置于诱导液Ⅱ中，在温度25±2℃，无光照的环境下，在摇床中以80～90rmin频率震摇12～24h；所述诱导液Ⅰ配方为：0.01～0.02%秋水仙素+0.5%二甲基亚砜；所述诱导液Ⅱ配方为：0.04～0.06%安磺灵+0.3%二甲基亚砜；（5）丛生芽生长：将染色体加倍诱导后的丛生芽再次接种于丛生芽诱导培养基中，置于温度25±2℃下暗培养7～10天，后温度不变，每日照光10h，光强2000～3000lx的光暗交替下培养30～35天；（6）形态筛选：培养30～35天后，筛选出叶片明显增厚，基部叶柄明显增宽增粗的百子莲丛生芽；（7）生根培养：将筛选出的丛生芽接种于生根培养基中，置于温度25±2℃，每日照光10h，光强2000～3000lx的光暗交替下培养30～40天；所述生根培养基配方为：12MS+0.2～0.3mgLNAA+0.5～0.8mgLIAA+活性炭0.2～0.4gL；（8）染色体鉴定。

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