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申请/专利权人：上海昊佰生物科技有限公司

摘要：本发明公开了一种骨肉瘤类器官的培养方法及其骨肿瘤培养基，本发明使用了2种培养方法，骨肉瘤类器官3D培养模型的制备方法和骨肉瘤类器官的气液培养模型的制备方法。本发明的一种骨肉瘤类器官3D培养模型的制备方法，包括如下步骤：1组织清洗:用含1xPen‑StrepGlutamineADMEMF1210ml清洗2‑5遍；2将组织切成1mm3大小后，用消化液消化30‑60分钟，消化后4℃，1200r离心5min；3用含1xPen‑StrepGlutamineADMEMF1210ml清洗3遍；4100uM细胞筛过滤后计数离心，Collagen加1‑100ugmllaminin中重悬后铺板；5培养期间每3‑4天更换一次骨肿瘤培养基；6类器官一般每15‑20天传代1次，传代时每孔加入2‑5倍量的TrpLEExpress。

主权项：1.一种骨肉瘤类器官3D培养模型的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）组织清洗:用含1xPen-StrepGlutamineADMEMF1210ml清洗2-5遍；（2）将组织切成1mm3大小后，用消化液消化30-60分钟，消化后4℃，1200r离心5min；（3）用含1xPen-StrepGlutamineADMEMF1210ml清洗3遍；（4）100uM细胞筛过滤后计数离心，Collagen加1-100ugmllaminin中重悬后铺板；（5）培养期间每3-4天更换一次骨肿瘤培养基；（6）类器官一般每15-20天传代1次，传代时每孔加入2-5倍量的TrpLEExpress；所述的骨肿瘤培养基由如下组分组成：Wnt3A条件培养基50%，不含维生素A的B27添加剂1x，N-乙酰半胱氨酸0.5mM，人胃泌素100nM，重组人表皮生长因子EGF5ngml，重组人Rspondin1蛋白900ngml，重组人Noggin蛋白400ngml，重组人碱性成纤维生长因子1020ngml，TGF-β受体抑制剂A83-019uM，抗生素Normocin1x，HEPES缓冲液100mM，Glutamax添加剂8mM，烟酰胺100mM，ROCK抑制剂Y-276321uM，抗生素GA1X，高级DMEMF12培养基补充至100%；所述的高级DMEMF12培养基由F12培养基和DMEM培养基组成，所述的F12培养基与DMEM培养基的体积比为1:1；Wnt3a条件培养基：由细胞株制备的上清液处理而成，制备用Wnt-3A细胞株，购自中科院细胞库。

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