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申请/专利权人:上海昊佰生物科技有限公司
摘要:本发明公开了一种骨肉瘤类器官的培养方法及其骨肿瘤培养基,本发明使用了2种培养方法,骨肉瘤类器官3D培养模型的制备方法和骨肉瘤类器官的气液培养模型的制备方法。本发明的一种骨肉瘤类器官3D培养模型的制备方法,包括如下步骤:1组织清洗:用含1xPen‑StrepGlutamineADMEMF1210ml清洗2‑5遍;2将组织切成1mm3大小后,用消化液消化30‑60分钟,消化后4℃,1200r离心5min;3用含1xPen‑StrepGlutamineADMEMF1210ml清洗3遍;4100uM细胞筛过滤后计数离心,Collagen加1‑100ugmllaminin中重悬后铺板;5培养期间每3‑4天更换一次骨肿瘤培养基;6类器官一般每15‑20天传代1次,传代时每孔加入2‑5倍量的TrpLEExpress。
主权项:1.一种骨肉瘤类器官3D培养模型的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)组织清洗:用含1xPen-StrepGlutamineADMEMF1210ml清洗2-5遍;(2)将组织切成1mm3大小后,用消化液消化30-60分钟,消化后4℃,1200r离心5min;(3)用含1xPen-StrepGlutamineADMEMF1210ml清洗3遍;(4)100uM细胞筛过滤后计数离心,Collagen加1-100ugmllaminin中重悬后铺板;(5)培养期间每3-4天更换一次骨肿瘤培养基;(6)类器官一般每15-20天传代1次,传代时每孔加入2-5倍量的TrpLEExpress;所述的骨肿瘤培养基由如下组分组成:Wnt3A条件培养基50%,不含维生素A的B27添加剂1x,N-乙酰半胱氨酸0.5mM,人胃泌素100nM,重组人表皮生长因子EGF5ngml,重组人Rspondin1蛋白900ngml,重组人Noggin蛋白400ngml,重组人碱性成纤维生长因子1020ngml,TGF-β受体抑制剂A83-019uM,抗生素Normocin1x,HEPES缓冲液100mM,Glutamax添加剂8mM,烟酰胺100mM,ROCK抑制剂Y-276321uM,抗生素GA1X,高级DMEMF12培养基补充至100%;所述的高级DMEMF12培养基由F12培养基和DMEM培养基组成,所述的F12培养基与DMEM培养基的体积比为1:1;Wnt3a条件培养基:由细胞株制备的上清液处理而成,制备用Wnt-3A细胞株,购自中科院细胞库。
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