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一种生产唾液酸乳糖-N-新四糖的基因工程菌 

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申请/专利权人:江南大学

摘要:本发明公开了一种生产唾液酸乳糖‑N‑新四糖的基因工程菌,属于微生物基因工程领域。本发明通过表达β‑1,3‑N‑乙酰葡糖胺基转移酶基因lgtA、β‑1,4‑半乳糖基转移酶基因lgtB、CMP‑唾液酸合成酶基因neuA、唾液酸乳糖转移酶基因bst*,形成了LSTc的代谢通路;并通过模块组合策略,利用质粒拷贝数微调转录水平;通过敲除LSTc代谢途径的旁支途径编码基因,优化前体UDP‑GlcNAc和UDP‑Gal模块的供给平衡,形成CTP辅因子再生系统,达到提高LSTc产量的目的。最终获得一株LSTc生产菌株,摇瓶产量为220.9mgL,3‑L发酵罐产量达到922.2mgL。

主权项:1.一株基因工程菌,其特征在于,所述基因工程菌以大肠杆菌为出发菌株,表达了β-1,3-N-乙酰葡糖胺基转移酶、β-1,4-半乳糖基转移酶、CMP-唾液酸合成酶以及唾液酸乳糖转移酶;敲除了出发菌株基因组上的以下基因:UDP-N-乙酰葡糖胺2-二聚酶编码基因wecB或甘露糖-6-磷酸异构酶编码基因mtlD;β-半乳糖苷酶编码基因lacZ,唾液酸醛缩酶编码基因nanA和6-磷酸果糖激酶编码基因pfkA;所述β-1,3-N-乙酰葡糖胺基转移酶、β-1,4-半乳糖基转移酶、CMP-唾液酸合成酶分别具有NCBI登录号为AAC44084.1、AAC44085.1、AAK91728.1所示的氨基酸序列,所述唾液酸乳糖转移酶具有如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列;所述基因lacZ、nanA、pfkA、wecB、mtlD分别具有GeneID为945006、947742、948412、944789、948117所示的核苷酸序列。

全文数据:

权利要求:

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