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申请/专利权人：镇江高等职业技术学校

摘要：本发明涉及柱前衍生LC‑MSMS测定鲜茶叶中的春雷霉素的检测方法。鲜茶叶样品经过甲醇水混合溶液提取，用MCXSPE固相萃取柱净化，滤液经浓缩后加入FMOC‑Cl溶液衍生化处理，用LC‑MSMS测定。色谱分离采用安捷伦EclipsePlusC18色谱柱，梯度洗脱；质谱采用电喷雾离子源，正离子模式扫描；多反应监控；喷雾电压4000V，离子源温度350℃，辅助气流速3mLmin，壳气流速3.8mLmin，碰撞气流速0.45mLmin，采用西马特罗作为内标进行定量。本发明检测灵敏度高，能有效去除样品基质的干扰，采用西马特罗作为内标校准，能确保检测结果的准确性。

主权项：1.一种柱前衍生LC-MSMS测定鲜茶叶中的春雷霉素的检测方法，步骤如下：1样品前处理1.1样品提取称取样品，在样品中加入西马特罗标准溶液，加入甲醇水溶液定容，混匀后离心，取上清液待净化；1.2净化依次用甲醇、去离子水活化MCXSPE柱，保持柱床湿润；加入步骤1.1制备的上清液过柱，等样液全部流过上筛板后立刻加入乙腈清洗MCXSPE柱保持柱身湿润，不能吹掉乙腈；加入含10％氨水的甲醇溶液洗脱待测组分，用10mL具塞刻度离心管收集全部滤液，氮吹至近干待衍生；1.3衍生化在上述10mL具塞刻度离心管中加入500μL去离子水，涡旋30s、超声2min。加入130μL5％硼酸钠和200μLFMOC-Cl溶液，补加去离子水至1.0mL刻度，混合均匀后在水浴锅上50℃衍生50min。取出离心管，8000转离心3min，取上清液依次过0.45μm和0.22μm水相膜供LC-MSMS测定；2配制春雷霉素衍生化标准工作溶液：按照步骤1.1在阴性样品中加入西马特罗标准溶液，然后加入春雷霉素标准溶液，加入甲醇水溶液定容，制成若干份浓度系列的春雷霉素标准溶液，春雷霉素标准溶液浓度范围0.312～20.0μgL，混匀后离心，取上清液待用；然后按照步骤1.2净化和1.3衍生化方法依次进行净化、衍生化，利用步骤3的LC-MSMS检测条件检测绘制生成标准工作曲线；3LC-MSMS检测条件色谱条件：采用安捷伦EclipsePlusC18色谱柱分离，梯度洗脱，流动相：流动相A为甲醇，流动相C为乙腈，流动相D为10mmolL乙酸铵溶液；梯度洗脱制度：0～2min，流动相C5％，流动相D95％；2～2.5min，流动相C由5％→15％，流动相D由95％→85％；2.5～4.5min，流动相C保持15％，流动相D保持85％；4.5～5.5min，流动相C由15％→30％，流动相D由85％→70％；5.5～7.5min，流动相C保持30％，流动相D保持70％；7.5～8.0min，流动相C由30％→50％，流动相D由70％→50％；8.0～9.0min，流动相C保持50％，流动相D保持50％；9.0～9.5min，流动相A由0％→100％，流动相C由50％→0％，流动相D由50％→0％；9.5～15.0min，流动相A保持100％；15.0～15.5min，流动相A由100％→0％，流动相C由0％→5％，流动相D由0％→95％；15.5～18.0min，流动相C保持5％，流动相D保持95％；流速：0.25mLmin；柱温：30℃；进样体积:25μL；质谱条件：电喷雾离子源ESI，正离子模式扫描；质谱扫描方式：多反应监控MRM；喷雾电压4000V；离子源温度350℃；辅助气流速3mLmin；壳气流速3.8mLmin；碰撞气流速0.45mLmin；4对经过步骤1处理的样品采用步骤3的LC-MSMS检测条件进行LC-MSMS检测；5采用西马特罗内标法校准。

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