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摘要：本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种生产异硫氰酸酯类的代谢工程菌株及其构建方法与应用。将自然界中天然存在于拟南芥中的异硫氰酸酯类合成途径，整合至酿酒酵母中，本发明提供了一种酿酒酵母工程菌株CEN.PK2‑1D，将途径酶基因作为打靶片段连同筛选标记Trp1打靶到酿酒酵母CEN.PK2‑1D‑SFN的多拷贝delta位点并反筛敲除Trp1基因后获得；所述打靶片段是由BACT4、MAM1、IPMILSUSSU、IPMDHI、BCAT3、CYP79F1、CYP83A1、ATR2、GSTF9、GGP1、SUR1、UGT74B1、ST5b和FMO‑GSOX1基因片段依次连接。所构建的工程菌株所产生的糖苷再与芥子酶反应生成SFN。再通过优化P450s的表达：CYP79F1共表达或融合表达ATR260tATR2，以此提高异硫氰酸酯化合物莱菔硫烷通量。本发明获得的工程菌株发酵生产莱菔硫烷的能力得到了大幅提高，具有较大的应用推广价值。

主权项：1.酿酒酵母工程菌株CEN.PK2-1D-SFN，其特征在于，将打靶片段连同筛选标记Trp1打靶到酿酒酵母CEN.PK2-1D的多拷贝delta位点并反筛敲除Trp1基因后获得：所述打靶片段是由BACT4、MAM1、IPMILSUSSU、IPMDHI、BCAT3、CYP79F1、CYP83A1、ATR2、GSTF9、GGP1、SUR1、UGT74B1、ST5b和FMO-GSOX1基因片段依次连接：所述BACT4基因片段是由BACT4基因两端分别连接其对应的启动子PGK1和终止子CYC1构成包括但不限于所用该启动子、终止子组合；所述MAM1基因片段是由MAM1基因两端分别连接其对应的启动子TDH1和终止子ADH1构成包括但不限于所用该启动子、终止子组合；所述IPMILSUSSU基因片段是由IPMILSUSSU基因两端分别连接其对应的启动子Adh1和终止子TDH2构成包括但不限于所用该启动子、终止子组合；所述IPMDHI基因片段是由IPMDHI基因两端分别连接其对应的启动子TEF1和终止子PGK1构成包括但不限于所用该启动子、终止子组合；所述BCAT3基因片段是由BCAT3基因两端分别连接其对应的启动子TDH3和终止子TDH3构成包括但不限于所用该启动子、终止子组合；所述CYP79F1基因片段是由CYP79F1基因两端分别连接其对应的启动子TEF1和终止子CYC1构成包括但不限于所用该启动子、终止子组合；所述CYP83A1基因片段是由CYP83A1基因两端分别连接其对应的启动子PGK1和终止子TDH1构成包括但不限于所用该启动子、终止子组合；所述ATR2基因片段是由ATR2基因两端分别连接其对应的启动子PGK1和终止子TDH2构成包括但不限于所用该启动子、终止子组合；所述GSTF9基因片段是由GSTF9基因两端分别连接其对应的启动子GPD和终止子ADH1构成包括但不限于所用该启动子、终止子组合；所述GGP1基因片段是由GGP1基因两端分别连接其对应的启动子ADH1和终止子PYK1构成包括但不限于所用该启动子、终止子组合；所述SUR1基因片段是由SUR1基因两端分别连接其对应的启动子HXT7和终止子HXT7构成包括但不限于所用该启动子、终止子组合；所述UGT74B1基因片段是由UGT74B1基因两端分别连接其对应的启动子PGK1和终止子ADH1构成包括但不限于所用该启动子、终止子组合；所述ST5B基因片段是由ST5B基因两端分别连接其对应的启动子TDH3和终止子TDH2构成包括但不限于所用该启动子、终止子组合；所述FMO-GSOX1基因片段是由FMO-GSOX1基因两端分别连接其对应的启动子TDH3和终止子TDH1构成包括但不限于所用该启动子、终止子组合。

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百度查询： 北京化工大学 一种酿酒酵母生产莱菔硫烷的代谢工程菌株及其构建方法与应用