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申请/专利权人：迈克生物股份有限公司

摘要：本发明涉及测定IgE的试剂组合，其包括第一试剂，该第一试剂含有固相支持物、第一抗IgE抗体、磷酸缓冲液、氯化钠、BSA和防腐剂；第三试剂，所述第三试剂含有第二抗IgE抗体、磷酸缓冲液、氯化钠、酪蛋白和防腐剂。通过提供该试剂组合有效降低了所有基质效应所带来的干扰，同时扩大了检测范围。此外，本发明还涉及测定IgE的方法。

主权项：1.一种试剂组合，包括：第一试剂，所述第一试剂由固相支持物、第一抗IgE抗体、缓冲液、生理盐、稳定剂和防腐剂组成，其中所述缓冲液是磷酸缓冲液，所述生理盐是氯化钠，并且所述稳定剂是BSA；第三试剂，所述第三试剂由第二抗IgE抗体、缓冲液、生理盐、稳定剂和防腐剂组成，或者由第二抗IgE抗体、缓冲液、生理盐、稳定剂、防腐剂和色素组成，其中所述缓冲液是磷酸缓冲液，所述生理盐是氯化钠，所述稳定剂是酪蛋白；和第二试剂，所述第二试剂由缓冲液、生理盐、稳定剂、防腐剂和阻断剂plus组成，或者由缓冲液、生理盐、稳定剂、防腐剂、阻断剂plus和色素组成，其中所述缓冲液是TRIS缓冲液，所述生理盐是氯化钠，所述稳定剂是BSA，其中，所述第一试剂含有1gL的固相支持物、10mgL的第一抗IgE抗体、20mM的磷酸缓冲液、10gL的氯化钠、10gL的BSA和3mLL的防腐剂，其中，所述第三试剂含有1mgL的第二抗IgE抗体、20mM的磷酸缓冲液、10gL的氯化钠、10gL的酪蛋白和3mLL的防腐剂，并且其中，所述第二试剂含有50mM的TRIS缓冲液、10gL的氯化钠、10gL的BSA、3mLL的防腐剂和20mgL的阻断剂plus。

全文数据：测定IgE的试剂组合技术领域本发明属于免疫体外诊断领域，具体涉及一种用于测定促IgE的试剂组合。背景技术IgE是免疫球蛋白质家族的成员，又称为反应素和亲细胞抗体，是介导I型超敏反应的主要抗体。IgE由B细胞分泌并在B细胞的表面上表达。B细胞合成的IgE通过经短膜结合区连接至成熟IgE序列的跨膜结构域锚定于B细胞膜中。IgE对肥大细胞及嗜碱性粒细胞具有高度亲和性，可与细胞表面的高亲和性受体FcεRI结合，当过敏原再次进入机体时，与致敏肥大细胞脱颗粒，释放生物活性物质，引发I性变态反映哮喘、枯草热、变态反应性皮炎等，此外IgE还有抗寄生虫感染的作用。IgE升高常见于超敏反应性疾病如过敏性鼻炎、外源性哮喘、枯草热、变态性皮炎、慢性荨麻疹、寄生虫感染以及IgE型多发性骨髓瘤、ADIS、非霍奇金淋巴癌、高IgE综合征Job综合征等，因此可通过对IgE水平的检测来对有关疾病进行辅助判断。美国临床标准化委员会NCCLS从两个角度定义了基质效应matrixeffect：样品中除分析物以外的其它组分对分析物测定值的影响；基质对分析方法准确测定分析物的能力的干扰。国际标准化组织对“基质效应”的定义为：除被测定物质以外样本的物征，它可以影响到被测物质的检测及检测结果ISO15189。Miller和Thomas等人所下的一个针对临床实验室的基质效应：不同于新鲜标本的反应特性使测定结果产生的偏差。总的来说，基质效应来自于生物标本中未知的或性质不明的物质或特性如黏度、表面张力、蒸汽压所引起的干扰，及除测定物质以外样本的物质，它可以影响到被测物的检测及检测结果。在对患者的血样进行测定时，基质效应主要来源于血清中的干扰物质，例如胆红素、生物素、甘油三酯、血红蛋白、维生素C、类风湿因子、HAMA抗体等。目前常用的IgE免疫测定方法有放射免疫分析法、酶联免疫分析法和化学发光免疫分析等。然而这些方法均会面临基质效应所带来的问题，从而干扰IgE的最终测定效果。因此，在IgE体外诊断领域，存在着降低测定时基质效应所带来的干扰的强烈需求。发明内容有鉴于此，本发明要解决的技术问题是如何从整体上有效地降低IgE检测时的基质效应和干扰。为此，本发明对IgE免疫测定的提供了一种用于测定IgE的试剂组合，所述试剂组合包括：第一试剂，所述第一试剂含有固相支持物、第一抗IgE抗体、磷酸缓冲液、氯化钠、BSA和防腐剂；第三试剂，所述第三试剂含有第二抗IgE抗体、磷酸缓冲液、氯化钠、酪蛋白和防腐剂。另外，对于本发明的试剂组合，进一步研究发现，通过调整第一试剂、第三试剂中各成分浓度范围，能够进一步减少基质效应的影响，使测定结果更为准确。因此，在优选的实施方式中，所述第一试剂含有0.03～3gL的固相支持物、0.5～30mgL的第一抗IgE抗体、5～60mM的磷酸缓冲液、2～25gL的氯化钠、1～25gL的BSA和或0.3～6mLL的防腐剂。所述第一抗IgE抗体可以包被于所述固相支持物上的方式存在。在具体的实施方式中，第一试剂中的组分的终浓度例如可以为：0.05gL或2.5gL的固相支持物；1mgL或25mgL的第一抗IgE抗体；10mM或50mM的磷酸缓冲液；4gL或20gL的氯化钠；2gL或20gL的BSA；和或0.5mLL或5mLL的防腐剂。在优选的实施方式中，第三试剂中第二抗IgE抗体为0.005～2.5mgL、磷酸缓冲液为5～60mM、氯化钠为1～25gL、酪蛋白为0.5～25gL和或防腐剂为0.3～6mLL。在具体的实施方式中，第三试剂中的组分的终浓度例如可以为：0.01mgL或2mgL的第二抗IgE抗体；10mM或50mM的磷酸缓冲液；2gL或20gL的氯化钠；1gL或20gL的酪蛋白；和或0.5mLL或5mLL的防腐剂。在另一个实施方式中，本发明的试剂组合可进一步包括第二试剂，其含有TRIS缓冲液、氯化钠、BSA、防腐剂和阻断剂plus。优选的，所述第二试剂含有5～110mM的TRIS缓冲液、2～25gL的氯化钠、1～25gL的BSA、0.3～6mLL的防腐剂和或3～45mgL的阻断剂plus。在具体的实施方式中，第二试剂中的组分的终浓度例如可以为：20mM或50mM的TRIS缓冲液；4gL或20gL的氯化钠；2gL或20gL的BSA；0.5mLL或5mLL的防腐剂；和或5mg或40mgL的阻断剂plus。在优选的实施方式中，所述固相支持物为磁微粒。在具体的实施方式中，所述第一抗IgE抗体可为鼠源的，所述第二抗IgE抗体可为鼠源的。更优选的，所述第一试剂中固相载体为0.5～1.5gL、第一抗IgE抗体为5～15mgL、磷酸缓冲液为16～24mM、氯化钠为8～12gL、BSA为8～12gL和或防腐剂为2.4～3.6mLL。尤其优选的，所述第一试剂中固相载体为1gL，第一抗IgE抗体为10mgL，磷酸缓冲液为20mM，氯化钠为10gL，BSA为10gL和或防腐剂为3mLL。更优选的，所述第三试剂中第二抗IgE抗体为0.5～1.5mgL、磷酸缓冲液为16～24mM、氯化钠为8～12gL、酪蛋白为8～12gL和或防腐剂为2.4～3.6mLL。尤其优选的，所述第三试剂中第二抗体为1mgL，磷酸缓冲液为20mM，氯化钠为10gL，酪蛋白为10gL和或防腐剂为3mLL。更优选的，所述第二试剂中TRIS缓冲液为40～60mM、氯化钠为8～12gL、BSA为8～12gL、防腐剂为2.4～3.6mLL和或阻断剂plus为16～24mgL。尤其优选的，所述第二试剂中TRIS缓冲液为50mM，氯化钠为10gL，BSA为10gL，防腐剂为3mLL，和或阻断剂plus为20mgL。在优选的实施方式中，所述第二试剂和或第三试剂可进一步包括色素；色素的浓度可例如为0.05～5gL。示例性的色素可以是果绿色素或柠檬黄。在具体的实施方式中，所述第一试剂与第二试剂的体积比可为1:0.2～5，优选为1:1～2。又一方面，本发明提供了一种测定IgE的方法，包括：1将来自受试者的样本与本发明的第一试剂混合；2加入本发明的第三试剂；3获得检测值。优选的，在步骤1中还加入了本发明的第二试剂。具体地，步骤1中形成待测物IgE-第一抗IgE抗体-固相支持物的复合物；而在加入第三试剂后，该复合物进一步可与第二抗IgE抗体结合，进一步形成固相支持物-第一抗IgE抗体-待测物-第二抗IgE抗体的复合体。在一个具体的实施方式中，第一步：加入样本、第一试剂和第二试剂，三者混匀反应；进入仪器清洗站，磁吸附去除液体；第二步：加入第三试剂混匀反应，再进入仪器清洗站，磁吸附去除液体；第三步：进入仪器检测系统，获得化学发光信号值，仪器软件根据相关曲线计算出测定浓度。本发明的有益效果在于提高了IgE免疫测定时的结果可靠性；又一方面，本发明通过一定的配比，在保证抗原、抗体反应效率的前提下，有效降低了基质效应、内源性和外源性等干扰；再一方面，本发明扩宽IgE免疫检测时的线性范围。附图说明图1显示了试剂组合2.1、试剂组合2.2和试剂组合3的测定结果，其中，纵坐标为RLU信号值，横坐标为校准品浓度IUmL；图2显示了将试剂组合3中第一、第二和第三试剂的NaCl替换为同浓度的KCl后的实验结果，其中，纵坐标为RLU信号值，横坐标为校准品浓度IUmL；图3显示了将试剂组合3中第二试剂的阻断剂plus替换为通浓度的阻断剂1、阻断剂2或阻断剂3后的实验结果，其中，纵坐标为采用本发明的试剂组合测定的样本浓度IUmL，横坐标为第三方测定的样本浓度IUmL。具体实施方式下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。在第一方面，本发明提供了一种能够有效降低夹心法IgE测定时的基质效应的试剂组合，该试剂组合包括第一试剂以及第三试剂。在本发明中，第一试剂可含有固相支持物、第一抗IgE抗体、磷酸缓冲液、氯化钠、BSA和防腐剂；第三试剂可含有第二抗IgE抗体、磷酸缓冲液、氯化钠、酪蛋白和防腐剂；本发明的试剂组合还包括第二试剂，第二试剂可含有TRIS缓冲液、氯化钠、BSA、防腐剂和阻断剂plus。除上述成分外，第一试剂、第二试剂和第三试剂还可以包括适合于测定IgE的其它成分，例如，稳定剂、表面活性剂和或额外的稳定剂等。除非特殊说明，本发明中的用语“第一”、“第二”和“第三”仅用于区分多个相似的要素，而不意在表示要素之间重要性或次序等方面的任何差异。优选的，本发明的试剂组合包含于试剂盒中。本领域技术人员能够理解，用于测定IgE的试剂盒除本发明的第一试剂和第三试剂外，还可以包括第二试剂、样品稀释液、清洗缓冲液和或校准品等。在本发明中，术语“固相支持物”、“固体支持物”、“固相载体”和“固体载体”可以互换使用，其是指可以附着抗IgE抗体的固体表面。对用于本发明的固相支持物没有特别的限制，商品化的固相支持物及任何可用于免疫检测的固相支持物均可用于本发明。示例性的固相支持物可以是磁微粒、微孔板、电极、塑料板、胶体金、乳胶珠、琼脂糖珠、玻璃、硝酸纤维素膜、尼龙膜、二氧化硅板或微芯片等，但本发明不限于此。在一个优选的实施方式中，所述固相支持物为磁微粒。在本发明中，术语“磁微粒”可与“磁珠”和“磁性粒子”互换使用。在本发明中，第二抗IgE抗体修饰有可检测的标记或其他生成信号的标记。这样的标记是本领域技术人员所熟知的，例如可以是氧化物酶、微过氧化物酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶以及葡萄醣6-磷酸脱氢酶等的酶；异硫氰酸荧光素、四甲基罗丹明异硫氰酸酯、荧光素、罗丹明、铕以及绿色荧光蛋白等的荧光物质；鲁米诺、异鲁米诺、菲啶鎓、以及吖啶酯等的化学发光物质；NAD等辅酶；生物素；35S、14C、32P、131I以及125I等的放射性物质。但本发明不限于此。在本发明中，防腐剂可以是体外诊断试剂中常用的防腐剂，本领域技术人员能够选择具体的防腐剂种类。示例性的防腐剂可以是Proclin系列防腐剂如PC-300、PC-950等，以及叠氮钠、庆大霉素C21H43N507等等，但本发明不限于此。以下通过实施例更详细地说明本发明，但本发明不限于这些实施例。实验材料阻断剂plus异噬性抗体阻断剂：购自四川迈克生物新材料科技有限公司，商品名为XCL1482；磁微粒：购自四川迈克生物新材料科技有限公司，商品名为XCL1026；第一抗IgE抗体四川迈克生物新材料科技有限公司，商品名为XCL1458；第二抗IgE抗体四川迈克生物新材料科技有限公司，商品名为XCL1459，后经吖啶酯标记；磷酸缓冲液，pH6.8-7.8；TRIS缓冲液，pH8.0-9.0。试剂配制方法第一试剂：配制方法，称取Na2HPO4·12H2O和NaH2PO4·2H2O用纯水溶解；再加入NaCl后充分溶解；然后加入BSA搅拌至完全溶解；最后加入防腐剂，并用纯水定容至相应体积。保存于2～8℃备用。第二试剂：配制方法，称取TRIS用纯水溶解,后加入浓盐酸调节至pH8.5附近；再加入NaCl后充分溶解；然后加入一定量的BSA搅拌至完全溶解；最后加入果绿色素和防腐剂，以及阻断剂plus，并用纯水定容至相应体积。保存于2～8℃备用。第三试剂：配制方法，称取Na2HPO4·12H2O和NaH2PO4·2H2O用纯水溶解；再加入NaCl后充分溶解；然后加入酪蛋白搅拌至完全溶解；最后加入果绿色素和防腐剂，并用纯水定容至相应体积。保存于2～8℃备用。测定方法标准曲线测定：使用重组IgE抗原四川迈克生物新材料科技有限公司，商品名XCL1460配制校准品，将各样本分别与50μl体积的第一试剂和50μl体积第二试剂混合，时长15min，清洗缓冲液洗涤4次，加入100μl体积的第三试剂混合，时长15min，清洗缓冲液洗涤4次，使用全自动化学发光免疫分析仪迈克电子股份有限公司，型号：i3000得到化学发光的信号值，用EXCEL或MEDICAL等软件计算相关系数。稀释线性测定：使用含有IgE的临床样本来自大家检验股份有限公司作为原倍样本，使用校准品稀释液分别进行1:2、1:5、1:25、1:125、1:625、1:3125和1:15625倍稀释，用本试剂盒并配套使用全自动化学发光免疫分析仪迈克电子股份有限公司，型号：i3000得到各样本的化学发光的信号值，用i3000仪器自带软件计算测定浓度；其中回收率由以下公式计算得到：回收率＝测定浓度值理论浓度值×100％。热稳定性测定：采用“标准曲线测定”记载的方法，使用于2～8℃和37℃保存7天的第一试剂、第二试剂和第三试剂组合成整体共同测定校准品的信号值，并通过以下公式计算信号保留率：信号保留率＝37℃下的信号值2～8℃下的信号值×100％。实施例1试剂组合1.1的配制采用“试剂配制方法”配制第一试剂和第三试剂，各成分终浓度如下所示：第一试剂：第三试剂：试剂组合1.2的配制在试剂组合1.1的基础上进一步包括第二试剂：测定方法与结果使用试剂组合1.1对稀释线性进行测定：使用校准品稀释液对IgE临床样本2220IUmL分别进行1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256和1:512倍稀释，将各样本分别与50μl体积的第一试剂混合，时长15min，清洗缓冲液洗涤4次，加入100μl体积的第三试剂混合，时长15min，清洗缓冲液洗涤4次，配套使用全自动化学发光免疫分析仪迈克电子股份有限公司，型号：i3000得到各样本化学发光的信号值，用仪器自带软件计算测定浓度。结果如下表1所示。表1稀释线性测定2试剂根据“稀释线性测定”中记载的方法其中，IgE临床样本的原倍浓度为2220IUmL，并使用试剂组合1.2对稀释线性进行测定，结果如下表2所示。表2稀释线性测定3试剂由表1和2可知，当样本的稀释比例大于1:16时，在使用2试剂的方法测得的回收率大于119％且随稀释倍数逐渐上升；而使用3试剂的方法在1:1～1:512的稀释范围内均有较好的回收率。也就是说，使用3试剂的方法，在稀释线性方面明显好于2试剂方法，其减少了基质效应的影响，测定结果更为准确。实施例2试剂组合2.1的配制采用“试剂配制方法”配制第一试剂、第二试剂和第三试剂，各成分终浓度如下所示：第一试剂：第二试剂：第三试剂：试剂组合2.2的配制采用“试剂配制方法”配制第一试剂、第二试剂和第三试剂，各成分终浓度如下所示：第一试剂：第二试剂：第三试剂：测定方法与结果根据“标准曲线测定”中记载的方法，分别使用试剂组合2.1和试剂组合2.2进行测定，结果如下表3所示。表3由表3可知，试剂组合2.1与试剂组合2.2标准曲线的信号值及比值基本一致，两者均能满足试剂对灵敏度和发光信号的要求。根据“稀释线性测定”中记载的方法其中，IgE临床样本的原倍浓度为2432.20IUmL，分别使用试剂组合2.1和试剂组合2.2进行测定，结果依次为下表4和表5所示。表4试剂组合2.1表5试剂组合2.2由表4和表5可知，使用试剂组合2.1和试剂组合2.2测定同一组稀释样本，两者回收率均在85％～115％之内，说明无明显基质效应。通过计算理论浓度与测定浓度的相关系数可知，试剂组合2.1和2.2的相关系数r均大于0.99，说明上述配方范围内均有良好的线性相关性。采用“热稳定性测定”中记载的方法，分别使用试剂组合2.1和试剂组合2.2进行测定，结果如下表6所示。表6由表6可知，试剂组合2.1和试剂组合2.2的37℃-7d信号保留率在85％～115％范围内，两组配方均能满足试剂对热稳定性的需求。实施例3试剂组合3的配制采用“试剂配制方法”配制第一试剂、第二试剂和第三试剂，各成分终浓度如下所示：第一试剂：第二试剂：第三试剂：测定方法与结果根据“标准曲线测定”中记载的方法，分别使用试剂组合2.1、试剂组合2.2和试剂组合3进行测定，结果如下表7和图1所示。表7由表7和图1可知，与试剂组合2.1和试剂组合2.2的配方比较，试剂组合3的背景噪音更低、灵敏度更高，高端信号更高且试剂组合线性范围更广。根据“稀释线性测定”中记载的方法其中，IgE临床样本的原倍浓度为5037.5IUmL，分别使用试剂组合2.1、试剂组合2.2和试剂组合3进行测定，结果为下表8所示。表8由表8可知，对于试剂组合2.1和2.2，除原倍样本外，在0.2～2500IUmL浓度下的回收率均介于85％～115％之内；经计算，该浓度范围下相关系数r大于0.99。对于试剂组合3，其回收率均在85％～115％的范围内，而0.2～5000IUmL浓度下其相关系数r大于0.99。也就是说，三个试剂组合均能满足检测需求，但相比之下试剂组合3的线性范围更宽。实施例4试剂组合4.1的配制将第一、第二和第三试剂中的NaCl替换为同浓度的KCl，其余与试剂组合3相同。试剂组合4.2的配制将第一试剂中的BSA替换为酪蛋白，其余与试剂组合3相同。试剂组合4.3的配制将第三试剂中的酪蛋白替换为BSA，其余与试剂组合3相同。试剂组合4.4的配制将第一和第三试剂中的磷酸盐缓冲液替换为同浓度的MES缓冲液pH6.0，其余与试剂组合3相同。试剂组合4.5的配制将第一和第三试剂中的磷酸盐缓冲液替换为同浓度的TRIS缓冲液pH8.0，其余与试剂组合3相同。试剂组合4.6的配制将第一和第三试剂中的磷酸盐缓冲液替换为同浓度的CB缓冲液pH9.5，其余与试剂组合3相同。试剂组合4.7的配制将第二试剂中的TRIS缓冲液替换为同浓度的磷酸盐缓冲液pH7.2，其余与试剂组合3相同。试剂组合4.8、4.9和4.10的配制将第二试剂中的阻断剂plus分别替换为同浓度的异噬性抗体阻断剂购自四川迈克生物新材料科技有限公司，商品名为XCL1508、金标阻断剂购自四川迈克生物新材料科技有限公司，商品名为XCL1426或异噬性抗体阻断剂购自武汉雁达生物公司，商品名为CN302，其余与试剂组合3相同。测定方法与结果根据“标准曲线测定”和“热稳定性测定”中记载的方法，分别使用试剂组合3和试剂组合4.1进行测定，结果如下表9和图2所示。表9由表9和图2可知，用KCl替换NaCl后低端信号值升高，且高端变化与低端变化趋势不一致，曲线变性明显，导致线性范围变窄。同时，替换为KCl后热稳定性变差。根据“标准曲线测定”和“热稳定性测定”中记载的方法，使用试剂组合3和试剂组合4.2进行测定，结果如下表10所示。表10由表10可知，将第一试剂中的BSA替换为酪蛋白后，信号值整体降低。热稳定性实验表明，整体信号保留率上升，变化幅度较大，说明第一试剂稳定性变差。根据“标准曲线测定”和“热稳定性测定”中记载的方法，使用试剂组合3和试剂组合4.3进行测定，结果如下表11所示。表11由表11可知，将第三试剂中的酪蛋白替换为BSA后，信号值整体上升且背景噪音变化明显；过高的背景噪音影响了灵敏度。热稳定性实验表明，替换后第三试剂的稳定性无明显差异。根据“标准曲线测定”和“热稳定性测定”中记载的方法，分别使用试剂组合3与试剂组合4.4、4.5和4.6进行测定，结果如下表12所示。表12由表12可知，将第一和第三试剂中的磷酸盐缓冲液替换为MES、TRIS或CB缓冲液后，信号值整体降低；就灵敏度来说，磷酸盐缓冲液体系最佳，TRIS体系次之，而MES或CB体系下由于背景噪音信号升高，而整体信号值降低导致灵敏度较差，不能满足试剂性能要求。热稳定性实验表明，MES体系最差、CB体系次之、TRIS体系较好但较磷酸盐体系本底信号及稳定仍有一定差异。将试剂组合3和试剂组合4.7于37℃放置7天后，对15例临床样本进行测定，并将测定结果与第三方结果进行比较，如下表13所示。表13由表13可知，将第二试剂的TRIS缓冲液替换为磷酸盐缓冲液后，整体测定结果偏高，部分样本异常偏高明显。类似地，采用试剂组合3与试剂组合4.8、4.9和4.10对30例临床样本进行测定，并将测定结果与第三方结果进行比较，如下表14和图3所示。表14由表14和图3所示，与第三方测定结果相比，使用阻断剂plus的试剂组合3具有较好的一致性，其测定结果相关系数r＞0.99。替换为阻断剂1后，临床样本测定出的异常值较多；替换为阻断剂2少部分样本测定结果升高；替换为阻断剂3后部分样本的测定结果显著降低。实施例5试剂组合5.1的配制向第二和第三试剂中分别加入0.01％和0.1％浓度的果绿色素，其余与试剂组合3相同。试剂组合5.2的配制去除第一、第二和第三试剂中的防腐剂PC-300，其余与试剂组合3相同。测定方法与结果根据“标准曲线测定”和“热稳定性测定”中记载的方法，分别使用试剂组合3和试剂组合5.1进行测定，结果如下表15所示。表15由表15可知，向本申请的试剂组合添加色素后，对反应信号的测定以及对试剂的热稳定性无显著影响。将试剂组合3和试剂组合5.2分别置于2～8℃下7天、2～8℃下60天或37℃下7天，根据“标准曲线测定”中记载的方法进行测定，结果如下表16所示。表16由表16及肉眼观察结果可知，防腐剂对于试剂组合信号无明显影响，但对试剂组合的长期保存有较明显的效果。

权利要求：1.一种试剂组合，包括：第一试剂，所述第一试剂含有固相支持物、第一抗IgE抗体、磷酸缓冲液、氯化钠、BSA和防腐剂；第三试剂，所述第三试剂含有第二抗IgE抗体、磷酸缓冲液、氯化钠、酪蛋白和防腐剂。2.根据权利要求1所述的试剂组合，所述试剂组合进一步包括：第二试剂，所述第二试剂含有TRIS缓冲液、氯化钠、BSA、防腐剂和阻断剂plus。3.根据权利要求1或2的试剂组合，其中，所述第一试剂含有0.03～3gL的固相支持物、0.5～30mgL的第一抗IgE抗体、5～60mM的磷酸缓冲液、2～25gL的氯化钠、1～25gL的BSA和0.3～6mLL的防腐剂。4.根据权利要求1或2的试剂组合，其中，所述第三试剂含有0.005～2.5mgL的第二抗IgE抗体、5～60mM的磷酸缓冲液、1～25gL的氯化钠、0.5～25g的酪蛋白和0.3～6mLL的防腐剂。5.根据权利要求2的试剂组合，其中，所述第二试剂含有5～110mM的TRIS缓冲液、2～25gL的氯化钠、1～25gL的BSA、0.3～6mLL的防腐剂和3～45mgL阻断剂plus。6.根据权利要求1或2的试剂组合，其中，所述第一试剂含有0.5～1.5gL的固相载体、5～15mgL的第一抗IgE抗体、16～24mM的磷酸缓冲液、8～12gL的氯化钠、8～12gL的BSA和2.4～3.6mLL的防腐剂。7.根据权利要求1或2的试剂组合，其中，所述第三试剂含0.5～1.5mgL的第二抗IgE抗体、16～24mM的磷酸缓冲液、8～12gL的氯化钠，8～12gL的酪蛋白和2.4～3.6mLL的防腐剂。8.根据权利要求2的试剂组合，其中，所述第二试剂含40～60mM的TRIS缓冲液、8～12gL的氯化钠、8～12gL的BSA、2.4～3.6mLL的防腐剂和16～24mgL的阻断剂plus。9.一种测定IgE的方法，包括1将来自受试者的样本与权利要求1～8中任一项中所定义的第一试剂混合；2加入权利要求1～8中任一项中所定义的第三试剂；3获得检测值。10.根据权利要求9所述的方法，其中，步骤1中进一步加入了权利要求2～8中任一项中所定义的第二试剂。

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