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申请/专利权人:山东大学
摘要:本发明涉及一种高表达啶南平A的工程菌及发酵培养基。目前啶南平A的微生物合成方法中,存在产量不足、次级代谢物较多等缺陷。本发明目的在于提供一种适合工业生产所需的工程菌,基于该目的,本发明以米曲霉作为出发菌株,导入NeosartoryafischeriDSM3700中与啶南平A合成相关的基因nef1‑nef9,得到工程菌A.oryzae‑nef1‑9。进一步的,本发明还提供了适宜该工程菌发酵的培养基,显著提升了啶南平A的产量,发酵时间3‑5天即可达到332.9mgL,且发酵产物中次级代谢物较少,满足工业发酵的需求。
主权项:1.一种高表达啶南平A的工程菌,其特征在于,所述工程菌的出发菌株为米曲霉,相比该出发菌株,所述工程菌被改造为具有啶南平A生物合成基因nef1-nef9:(1)nef1为辅酶A连接酶基因,核苷酸序列如SEQIDNo.1所示;(2)nef2为聚酮合酶基因,核苷酸序列如SEQIDNo.2所示;(3)nef3为细胞色素P450酶基因,核苷酸序列如SEQIDNo.3所示;(4)nef4为环化酶基因,核苷酸序列如SEQIDNo.4所示;(5)nef5为5FAD依赖性单加氧酶基因,核苷酸序列如SEQIDNo.5所示;(6)nef6为异戊烯基转移酶基因,核苷酸序列如SEQIDNo.6所示;(7)nef7为乙酰转移酶基因,核苷酸序列如SEQIDNo.7所示;(8)nef8为乙酰转移酶基因,核苷酸序列如SEQIDNo.8所示;(9)nef9为细胞色素P450酶基因,核苷酸序列如SEQIDNo.9所示;所述出发菌株为米曲霉AspergillusoryzaeNSAR1;所述高表达啶南平A的工程菌的构建方法,包括如下步骤:加入引物扩增nef1-nef9基因,在每个基因两端引入同源臂,随后使用Gibson组装方式,将基因依次连接至载体上。
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权利要求:
百度查询: 山东大学 一种高表达啶南平A的工程菌及发酵培养基
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