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一种基于邻位连接电化学发光分析的MC-LR检测方法 

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申请/专利权人:无锡学院

摘要:本发明公开了一种基于邻位连接电化学发光分析的检测MC‑LR方法,包括步骤S1.将Rubpy32+、AuNPs和Nafion混合均匀,修饰在玻碳电极表面,形成Rubpy32+AuNPsNafionGCE的电化学发光平台;S2.捕获DNA通过金硫键自组装固定在所述电化学发光平台表面,得到电化学发光适体传感器;S3.将制备好的电化学发光适体传感器浸入待测MC‑LR的检测溶液,进行孵育;S4.以孵育完成后的电化学发光适体传感器作为工作电极,浸入包含三丙胺的PBS缓冲溶液中,采用电化学发光仪测定待测溶液中MC‑LR的含量;所述检测溶液包含MC‑LR适体、DNA1和DNA2。本发明基于四条DNA协同形成邻位连接复合物的设计,在一个邻位连接复合物中引入三个淬灭基团,提高方法的灵敏度和特异性;本方法为一步法检测,步骤简单,分析快速,可用于测定MC‑LR含量。

主权项:1.一种基于邻位连接电化学发光分析的MC-LR检测方法,其特征在于,包括如下步骤:S1.将Rubpy32+、AuNPs和Nafion混合均匀,修饰在玻碳电极表面,形成Rubpy32+AuNPsNafionGCE的电化学发光平台;S2.将捕获DNA通过金硫键自组装固定在步骤S1所述电化学发光平台表面,得到电化学发光适体传感器;S3.将制备好的电化学发光适体传感器浸入待测MC-LR的检测溶液,进行孵育;S4.以孵育完成后的电化学发光适体传感器作为工作电极,浸入包含三丙胺的PBS缓冲溶液中,采用电化学发光仪记录其电化学发光强度,根据电化学发光强度与已知MC-LR含量建立的标准曲线,测定待测溶液中MC-LR的含量;所述检测溶液包含MC-LR适体、DNA1和DNA2;所述MC-LR适体为DNA单链适体;所述捕获DNA为单链结构,捕获DNA一端修饰巯基,远离修饰巯基一端的碱基序列与MC-LR适体的一端互补;所述DNA1两端均修饰有二茂铁,DNA1一端的碱基序列与捕获DNA的靠近修饰巯基一端互补,DNA1中部的碱基序列与所述MC-LR适体中部互补;所述DNA2一端修饰有二茂铁,靠近二茂铁一端的碱基序列与DNA1的另一端互补,DNA2远离二茂铁一端的碱基序列与MC-LR适体的另一端互补;所述捕获DNA和DNA1含有9-21个互补的碱基对,捕获DNA和MC-LR适体一端含有15-27个互补的碱基对,DNA1中部和MC-LR适体的中部含有10-18个互补的碱基对,DNA1和DNA2含有9-21个互补的碱基对,DNA2和MC-LR适体的另一端含有15-27个互补的碱基对;步骤S3所述进行孵育,其反应条件为25-37℃下孵育30-60min。

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权利要求:

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