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申请/专利权人:首都医科大学附属北京天坛医院
摘要:本申请涉及唾液腺类器官分化培养基及分化培养方法。该培养基包括在不同阶段使用的分化培养基I、分化培养基II和分化培养基III,所述分化培养基I包括基础培养基、血清、EGF、成纤维细胞生长因子、HGF、N‑2添加剂、维生素A酸和肝素钠,所述分化培养基II包括所述分化培养基I成分和Rho激酶抑制剂,所述分化培养基III包括所述分化培养基II成分和GSK‑3抑制剂。一种诱导唾液腺类器官分化的方法,包括采用如上述的培养基进行培养,获得成熟分化唾液腺类器官。本申请提供的分化培养基能够满足增殖唾液腺类器官分化成状态良好的成熟分化唾液腺类器官,结合本申请方法步骤,能够实现稳定的分化,分化成功率高。
主权项:1.唾液腺类器官分化培养基,其特征在于,包括在不同阶段使用的分化培养基I、分化培养基II和分化培养基III,所述分化培养基I包括基础培养基、血清、EGF、成纤维细胞生长因子、HGF、N-2添加剂、维生素A酸和肝素钠,所述分化培养基II包括所述分化培养基I的成分和Rho激酶抑制剂,所述分化培养基III包括所述分化培养基II的成分和GSK-3抑制剂;在所述分化培养基I中,血清的用量为5%~20%,EGF的终浓度为20~60ngmL,成纤维细胞生长因子的终浓度为20~80ngmL,HGF的终浓度为2.5~10ngmL,N-2添加剂的终浓度为0.5x~2x,维生素A酸的终浓度为0.5~2µM,肝素钠的终浓度为40~120ngmL;在所述分化培养基II中,血清的用量为5%~20%,EGF的终浓度为20~60ngmL,成纤维细胞生长因子的终浓度为20~80ngmL,HGF的终浓度为2.5~10ngmL,N-2添加剂的终浓度为0.5x~2x,维生素A酸的终浓度为0.5~2µM,肝素钠的终浓度为40~120ngmL,Rho激酶抑制剂的终浓度为0.5~2µM;在所述分化培养基III中,血清的用量为5%~20%,EGF的终浓度为20~60ngmL,成纤维细胞生长因子的终浓度为20~80ngmL,HGF的终浓度为2.5~10ngmL,N-2添加剂的终浓度为0.5x~2x,维生素A酸的终浓度为0.5~2µM,肝素钠的终浓度为40~120ngmL,Rho激酶抑制剂的终浓度为0.5~2µM,GSK-3抑制剂的终浓度为2~10µM;所述血清为FBS,所述成纤维细胞生长因子选自:(1)bFGF和FGF10,(2)bFGF和FGF7,或(3)bFGF、FGF10和FGF7。
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