买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：浙江熙正霖生物科技有限公司

摘要：本发明公开了一种N‑乙酰神经氨酸的生物合成方法。本发明利用重组大肠杆菌进行N‑乙酰神经氨酸的生物合成，其中重组大肠杆菌通过以下方法构建：以质粒pETDuet为骨架，删除lacI基因，将原有的T7启动子用组成型启动子PJ23101进行替换，插入基因gna1和glmS，得到质粒pETDuet‑gna1‑glmS；以质粒pCDFDuet为骨架，删除lacI基因，将原有的T7启动子用来源于质粒pBV220的温敏启动子回路cIts‑pR‑pL进行替换，插入基因age和neuB，得到质粒pCDFDuet‑age‑neuB；将所得质粒导入大肠杆菌得到重组大肠杆菌。所得重组大肠杆菌以葡萄糖为底物，无需诱导剂，可发酵得到N‑乙酰神经氨酸，生产效率高，适用于工业化放大生产；所得发酵液经分离提纯可得高纯度的产品，满足原料质量要求。

主权项：1.一种高产N-乙酰神经氨酸的重组大肠杆菌的构建方法，其特征在于：以质粒pETDuet为骨架，删除lacI基因，将质粒pETDuet原有的T7启动子用组成型启动子PJ23101进行替换，插入氨基葡萄糖-6-磷酸乙酰基转移酶编码基因gna1和果糖-6-磷酸氨基转移酶编码基因glmS，得到质粒pETDuet-PJ23101-gna1-PJ23101-glmS；以质粒pCDFDuet为骨架，删除lacI基因，将质粒pCDFDuet原有的T7启动子用温敏启动子回路cIts-pR-pL进行替换，插入N-乙酰葡萄糖胺-2差向异构酶编码基因age和N-乙酰神经氨酸合成酶编码基因neuB，得到质粒pCDFDuet-cIts-pR-pL-age-pR-neuB；将所述质粒pETDuet-gna1-glmS和质粒pCDFDuet-age-neuB导入宿主大肠杆菌，构建得到高产N-乙酰神经氨酸的重组大肠杆菌；所述的氨基葡萄糖-6-磷酸乙酰基转移酶编码基因gna1来源于Saccharomycescerevisiae并经大肠杆菌密码子优化，其核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；所述果糖-6-磷酸氨基转移酶编码基因glmS来源于大肠杆菌K-12，其核苷酸序列如SEQIDNo.3所示；所述N-乙酰葡萄糖胺-2差向异构酶编码基因age来源于Synechocystissp.PCC6803并经大肠杆菌密码子优化，其核苷酸序列如SEQIDNo.5所示；所述N-乙酰神经氨酸合成酶编码基因neuB来源于大肠杆菌K1，其核苷酸序列如SEQIDNo.6所示；所述宿主大肠杆菌为大肠杆菌K-12MG1655。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江熙正霖生物科技有限公司 一种N-乙酰神经氨酸的生物合成方法