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申请/专利权人：中国科学院基础医学与肿瘤研究所(筹)
摘要：本发明提出了一种糖基化蛋白来源多肽的筛选方法与多肽疫苗组合，首先建立一系列筛选包含特定糖链修饰位点的抗原多肽的流程，虚拟筛选结合体内外试验优化并验证多肽序列，增强多肽的亲和力和活化CTL的能力，联合聚糖佐剂和NGI‑1等组合，较单抗原、佐剂、NGI‑1及其两两组合，具有显著的抗肿瘤免疫作用。本发明专利采用质谱联合DNA、mRNA高通量测序等多种手段分析和鉴定特定N‑糖链修饰的位点及位点残基的保守性，并进一步预测T细胞和B细胞抗原表位，相较于目前大多数研究直接采用数据库预测蛋白的抗原表位，表位的筛选更为高效精准。
主权项：1.一种糖基化蛋白来源多肽的筛选方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、采用液相色谱-质谱联用分析和鉴定多种肿瘤细胞和正常上皮细胞的N-糖基化修饰蛋白的糖链类型与修饰位点，并筛选具有特定糖型修饰的残基位点；S2、采用DNA全外显子测序和真核生物mRNA转录组测序检测特定糖链修饰位点的DNA突变和mRNA转录情况，明确位点残基表达的保守性；S3、采用UniProt、Provean数据库了解蛋白质序列、糖基化修饰位点保守性以及位点突变对蛋白稳定性影响的相关参数，明确包含特定糖型修饰位点包括NX突变的多肽序列；S4、采用NetMHCpan4.1数据库预测HLA-I分子与多肽序列包括NX突变的亲和力以及B细胞线性表位，明确具有高HLA-I预测亲和力且包含B细胞线性表位的九肽抗原包括糖基化位点NX；S5、采用虚拟筛选的手段，预测HLA-I分子与九肽抗原包括糖基化位点NX的结合稳定性；并体外合成九肽包括糖基化位点NX；S6、采用ELISpot验证步骤S5中所述九肽及其疫苗组合诱导并活化CTL细胞释放IFN-γ的水平；采用荷瘤小鼠模型体内验证多肽疫苗组合的抗肿瘤免疫作用。
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权利要求：
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