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申请/专利权人：中国科学院新疆理化技术研究所

摘要：本发明公开了从东亚钳蝎中分离抗白癜风活性多肽的方法和应用。该方法首先将东亚钳蝎干体粉碎成粉末，由石油醚充分脱脂；再将脱脂粉用磷酸盐缓冲溶液低温提取，离心取上清，冷冻干燥得到粗提物，将粗提物去离子水复溶，离心，利用离子交换色谱、凝胶色谱分离纯化，得到5个东亚钳蝎多肽组分，分别命名为SE3‑F1、SE3‑F2、SE3‑F3、SE3‑F4和SE3‑F5；并对5个东亚钳蝎多肽组分检测对细胞内相对黑色素含量的活性结果表明：SE3‑F4的相对黑色素含量分别为133.9±7.820%，略高于阳性对照；SE3‑F4组分主要含有分子量范围4.1kDa‑9.5kDa，总蛋白质含量为87.34%，具有较强抗白癜风活性。该方法降低了提取成本，提高了安全性，提取率高，性质稳定，纯度高的优点，提取耗时短，重复性高。可用于抗白癜风药物和保健品领域。

主权项：1.一种从东亚钳蝎中分离抗白癜风活性多肽的方法，其特征在于，所述东亚钳蝎多肽的分子量为4.1kDa-9.5kDa；为偏酸性多肽，具体操作按下列步骤进行：a、取东亚钳蝎干体，粉碎成细粉，按质量体积比1:5的全蝎干体细粉:石油醚，将东亚钳蝎干体细粉中加入石油醚，在室温下振荡4小时进行脱脂3-4次至无色为止，再将脱脂后的东亚钳蝎细粉自然沉降与石油醚分离后，倾倒出上层石油醚进行回收，合并沉淀物，自然干燥，得到脱脂的东亚钳蝎粉，置于温度-40℃冰箱保存，备用；b、将步骤a中脱脂后的东亚钳蝎粉末中加1000mLpH为7.4-7.8，0.1molL的磷酸盐缓冲液，料液比为1:10，温度为4℃，以100-300rmin匀速搅拌提取3次，每次12小时，得到提取液；c将步骤b中的提取液经10000rmin，温度4℃，离心10min，再经温度4℃，1000Da透析袋透析48小时，透析液冻干24小时，压力9.8Pa，温度-80℃，得到的粗提物；d、将步骤c中得到的粗提物用水溶解，加入硫酸铵使浓度达到50%，温度4℃,沉淀12小时，沉淀，10000rmin，温度4℃，离心10min，再将得到的沉淀冻干24小时，压力9.8Pa，温度-80℃，得到50%粗提蛋白质沉淀部位；e、将步骤d中得到的粗提蛋白质部位溶于pH=6.3，15mM磷酸盐缓冲液中，用15mM、pH=6.3磷酸缓冲液平衡DEAE-25阴离子交换树脂，流速为1mLmin，0-0.6molL氯化钠，15mM磷酸缓冲溶液梯度洗脱分离，在波长280nm处测定吸光度，以吸收峰来收集洗脱液得到5个蛋白质和多肽组分的混合物，分别为SE1、SE2、SE3、SE4和SE5；f、将步骤e中的5个蛋白质和多肽组分的混合物SE1、SE2、SE3、SE4和SE5，分别在温度4℃环境下，用1000Da透析袋透析脱盐，每4小时换1次透析溶液，共替换8次，再分别用真空冷冻干燥机冻干，冷冻干燥温度为-80℃，压力为10Pa，时间为24小时，得到5个蛋白质和多肽组分混合物干燥粉末；g、将步骤f中得到的SE3部位粉末，溶于0.1%甲酸-水溶液中，震荡10min，在温度4℃静止1小时，离心，离心温度为4℃，离心时间为10min，离心转速为8000rmin，取上清液；h、将步骤g中得到的上清液，用体积0.1%甲酸-水溶液平衡的HW-40F凝胶树脂分离，上样量为50-200mg，流速为0.4mLmin，洗脱液为体积0.1%甲酸-水进行提洗脱，得到5个东亚钳蝎多肽组分，分别命名为SE3-F1、SE3-F2、SE3-F3、SE3-F4和SE3-F5。

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