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申请/专利权人：武汉大学

摘要：本发明公开了一种用于室温检测RNA的组合物及试剂盒，该组合物包括：目标RNA的反转录引物和反转录酶，用于合成目标RNA的反向互补序列，反转录引物的长度为10～20个核苷酸；RPA反向引物、RPA正向引物、重组酶、DNA聚合酶、T7RNA聚合酶，用于扩增目标RNA的双链DNA扩增子，并以双链DNA扩增子为底物合成包含目标RNA的反向互补序列的长链RNA；双链DNA扩增子由目标RNA及其反向互补序列碱基互补配对形成，RPA反向引物的5’端包含T7RNA聚合酶启动子序列；Cas13a蛋白及其crRNA，crRNA用于靶向识别目标RNA的反向互补序列，Cas13a蛋白用于切割目标RNA的反向互补序列；TaqMan荧光探针，其能在目标RNA的反向互补序列被切割时被Cas13a蛋白非特异切割，释放荧光基团。该组合物能在20℃、30min内检测到0.5cpμL的目标RNA。

主权项：1.一种用于室温检测RNA的组合物，其特征在于，包括：目标RNA的反转录引物和反转录酶，用于合成目标RNA的反向互补序列，所述反转录引物的长度为10~20个核苷酸；RPA反向引物、RPA正向引物、重组酶、DNA聚合酶、T7RNA聚合酶，用于扩增目标RNA的双链DNA扩增子，并以双链DNA扩增子为底物合成包含目标RNA的反向互补序列的长链RNA；所述双链DNA扩增子由目标RNA及其反向互补序列碱基互补配对形成，RPA反向引物的5’端包含T7RNA聚合酶启动子序列；Cas13a蛋白及其crRNA，所述crRNA用于靶向识别目标RNA的反向互补序列，所述Cas13a蛋白用于切割目标RNA的反向互补序列；所述Cas13a蛋白为LwaCas13a、LbaCas13a、LshCas13a、PprCas13a、EreCas13a、CamCas13a、RcaCas13a、HheCas13a、LbuCas13a、LseCas13a、LbmCas13a、LbnCas13a、RcsCas13a、RcrCas13a、RcdCas13a、CgCas13a、Cg2Cas13a、LweCas13a、LbfCas13a、LneCas13a、HheCas13a中的至少一种；TaqMan荧光探针，其能在目标RNA的反向互补序列被切割时被Cas13a蛋白非特异切割，释放荧光基团。

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权利要求：

百度查询： 武汉大学 一种用于室温检测RNA的组合物及试剂盒