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申请/专利权人：广东生态工程职业学院;广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所;广州林芳生态科技有限公司

摘要：本发明公开了一种兰花蕉组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：1外植体的获得和消毒；2不定芽诱导和继代培养；3生根培养；4试管苗移栽。本发明通过选用兰花蕉的嫩芽茎尖作为外植体，优化消毒步骤，选择改良的MS培养基、改良的12MS培养基代替普通MS培养基，进行外植体顶芽诱导、不定芽增殖培养及生根壮苗培养，显著提高了兰花蕉不定芽的诱导率、丛生芽的增殖率、幼苗的生根率和成活率，能在短时间内繁殖出大量的试管苗以满足市场的需要。本发明技术简单实惠，切实可行，应用价值高。实施本发明只需有简单的植物组织培养设备即可进行。

主权项：1.一种兰花蕉组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）外植体的获得和消毒：将兰花蕉的根状茎洗净后种植于以河沙为基质的盆中，放入温室培养，期间进行杀菌培养并直至根状茎产生嫩芽；将刚冒出沙面5~10天的嫩芽从地下挖出后不能水洗，先切去上部叶片，并剥除假茎外部叶片，然后将2~3厘米的小芽进行消毒，剔除多余组织处理后接种于培养基中培养直至外植体顶芽长出，所述的培养基组成为：改良的MS培养基+2.0mgL6-BA+0.3mgLNAA+30gL蔗糖+6gL琼脂，pH5.8；（2）不定芽诱导和继代培养：将诱导出的顶芽切成小块，接种于增殖培养基中进行不定芽增殖培养，所述的增殖培养基为：改良的MS培养基+3.0mgL6-BA+3.0mgL6-KT+100mLL椰子水+30gL蔗糖+6gL琼脂，pH5.8；（3）生根培养：当芽高2~3cm时，切下接种到生根培养基中培养，得到生根试管苗；所述的生根培养基为：改良的12MS培养基+1.0mgLIBA+2.0gL活性炭+20gL蔗糖+6gL琼脂，pH6.0；（4）试管苗移栽：当生根试管苗长至4~5cm时，在自然光下炼苗7~10天，然后打开瓶塞，用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入基质中培养；步骤（1）中温室培养期间进行杀菌培养，具体为：先用70%代森锰锌可湿性粉剂500~700倍液浇灌一次并喷施叶片，7天后用72%农用链霉素可溶性粉剂3000~4000倍液浇灌一次并喷施叶片，然后再过7天，重复上述步骤，共处理4次，最后1次浇灌链霉素后7天取根状茎产生的嫩芽进行组织培养；步骤（1）中将2~3厘米的小芽进行消毒，剔除多余组织处理，具体为：将小芽先在75%酒精中浸泡10~30秒，再用0.1%升汞溶液消毒5~10分钟，无菌水冲洗4~6次后，再剥除里面的嫩叶，再放入0.1%升汞溶液消毒2~4分钟，无菌水冲洗4~6次后，切除生长点周围的一些组织；步骤（1）和步骤（2）中改良的MS培养基为普通MS培养基配方中的硝酸胺浓度由1650mgL调整为2000mgL、硝酸钾浓度由1900mgL调整为1500mgL，其余成分不变；步骤（3）中改良的12MS培养基为普通MS培养基配方中的大量元素用量减半，其余成分不变，并含有B5培养基的有机成分；所述的B5培养基的有机成分的组成为：100mgL肌醇+1.0mgL烟酸+1.0mgL盐酸吡哆醇+10.0mgL盐酸硫铵素+2.0mgL甘氨酸。

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