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一种重组人源化III型胶原蛋白制备方法 

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申请/专利权人:安徽润朗集录生物医药科技有限公司

摘要:本发明公开了一种重组人源化III型胶原蛋白制备方法,该方法包括以下步骤:S1:合成人源化III型胶原蛋白基因;S2:构建pBI121‑EGFP‑hCOL3A1重组表达载体;S3:重组表达载体导入野生型小球藻;S4:转化成功小球藻;S5:收集转化小球藻细胞;S6:提取小球藻总蛋白;S7:将提取的小球藻总蛋白过Ni2+亲和柱进行纯化,得到重组人源化III型胶原蛋白。本发明提供一种重组人源化III型胶原蛋白制备方法,以基因工程小球藻为发酵平台,不存在内毒素污染的可能,成本低、不易污染其它微生物,且小球藻所用的培养中不含有机营养物质。

主权项:1.一种重组人源化III型胶原蛋白制备方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:S1:合成人源化III型胶原蛋白基因从NCBI数据库查询人源化III型胶原蛋白基因的mRNA序列,根据所述mRNA序列采用直接合成的方法合成人源化III型胶原蛋白基因;S2:构建pBI121-EGFP-hCOL3A1重组表达载体将合成的人源化III型胶原蛋白基因插入pBI121-EGFP载体,构建得到pBI121-EGFP-hCOL3A1重组表达载体;S3:重组表达载体导入野生型小球藻使用电穿孔法将pBI121-EGFP-hCOL3A1重组表达载体导入到野生型小球藻中,制备得电击后小球藻液;S4:转化成功小球藻取电击后小球藻液进行培养,使用G418筛选后进行不断继代培养,得到培养后小球藻,并对培养后小球藻进行验证,获得转化成功小球藻;S5:收集转化小球藻细胞将转化成功小球藻接种入SE培养基中进行培养,培养至平台期后通过离心收集转化小球藻细胞;S6:提取小球藻总蛋白使用蛋白质提取试剂盒从收集的转化小球藻细胞中提取小球藻总蛋白;S7:将提取的小球藻总蛋白过Ni2+亲和柱进行纯化,得到重组人源化III型胶原蛋白。

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