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申请/专利权人：海南盛美诺生物技术有限公司

摘要：本发明公开了一种利用牛心脉管提取弹性蛋白的方法，涉及蛋白提取技术领域。本发明先将粉碎后的牛心脉管利用碱液微波加热后，在超声波辅助下，利用水解蛋白酶提取蛋白，再利用中性蛋白酶结合大孔树脂进行吸附脱色，减少弹性蛋白损失，然后利用红外加热灭酶，并实现初步浓缩；接着通过自制除菌膜，减少弹性蛋白的微生物含量，并且进一步浓缩，最后通过喷雾冷冻干燥固化弹性蛋白，其中，自制除菌膜在超声波辅助下，利用十二烷基邻苯二甲酸酯、十二烷基二甲胺改性纤维素，并与聚偏氟乙烯交联，赋予自制除菌膜高效杀菌和优异的力学性能。本发明制备的利用牛心脉管提取弹性蛋白纯度高、微生物含量低、耗时短。

主权项：1.一种利用牛心脉管提取弹性蛋白的方法，其特征在于，主要包括以下制备步骤：1将牛心脉管、牛心脉管质量3～5倍的纯化水置于胶体磨粉碎机中，粉碎3～5min，得浆液；2将浆液置于玻璃容器，加入质量分数为5％的氢氧化钠至溶液pH为7.0～7.5，置于微波炉中，微波功率为600～700W，加热50～70s后，冷却至室温，得加热提取液；3将加热提取液置于超声波清洗机，超声波功率为140～160W，加入牛心脉管质量0.03倍的水解蛋白酶，提取40～60min，得酶解提取液；4将酶解提取液置于离心机中，4000～4500rpm下离心10～15min后，置于50℃恒温水浴锅中，加入牛心脉管质量0.01倍的中性蛋白酶，酶解9～11min后，加入牛心脉管质量0.1倍的大孔树脂，吸附40～50min，过滤得上清液；5将上清液置于红外发生器，红外能强度为3～5kWm2，灭酶6～8min，加入质量分数为5％的盐酸至溶液pH为4.8～5.0；然后置于离心机中，6000～6200rpm下离心13～15min，得弹性蛋白；6将纤维素溶于纤维素质量40～45倍的去离子水，200～250W下超声溶解3～5min后，升温至80～100℃，加入纤维素质量1.2～1.5倍的十二烷基邻苯二甲酸酯，200～300rpm下搅拌20～30min后，在200～300W超声功率下反应50～60min，冷却至室温，300rpm、80℃下旋蒸3～5h得芳基化纤维素；7将芳基化纤维素加入三颈烧瓶中，边以50rpm的速度搅拌边加入芳基化纤维素质量7.5～8倍的质量分数为65％的盐酸、芳基化纤维素质量0.35～0.4倍的多聚甲醛，控制温度在15～25℃，以0.5～0.7mLmin的速度滴加芳基化纤维素质量0.4～0.5倍的三氯氧磷，300～400rpm下反应16～20h，抽滤，依次用去离子水、碳酸氢钠水溶液洗涤7～10次，碳酸氢钠水溶液中碳酸氢钠和去离子水的质量比为1:32，再用蒸馏水洗涤至溶液pH为6～7、60℃、0.02MPa下真空干燥2～3h，得氯化纤维素；8将氯化纤维素、氯化纤维素质量3～3.5倍的乙酸乙酯加入反应瓶，搅拌溶解，0～2℃冰水浴冷却下，加入氯化纤维素质量0.6～0.7倍的十二烷基二甲胺，室温下反应20～24h后，过滤，得改性纤维素；9将聚偏氟乙烯置于100℃、0.08MPa的真空烘箱中干燥20～24h，加入聚偏氟乙烯质量2～3倍的磷酸三乙酯，200～300rpm下搅拌4～5h，置入外层纺丝料液罐内，静置脱泡12～14h；将改性纤维素、二甲基甲酰胺、丙酮和甘油按质量比1:1.45:0.88:3加入内层纺丝料液罐内；200～300rpm下搅拌2～4h，静置脱泡8～10h，共挤出制得中空纤维膜；10145～155℃下，中空纤维膜在300～400W功率的超声辐照下处理5～10min后，室温下静置2～3h得自制除菌膜；11将弹性蛋白通过自制除菌膜进行杀菌；12将杀菌后的弹性蛋白进行喷雾冷冻干燥，完成利用牛心脉管提取弹性蛋白。

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