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申请/专利权人：豪夫迈·罗氏有限公司

摘要：本文提供了用于产生含有两条链的多肽诸如抗体、半抗体、抗体片段或单臂抗体的方法和宿主细胞。所述方法和宿主细胞允许使用以下方式来产生双链多肽：表达编码来自染色体外多核苷酸的多肽链的多核苷酸，以及使用启动子和编码伴侣蛋白质的翻译单元的非天然组合来表达一种或多种来自宿主细胞染色体的伴侣蛋白质例如，肽基脯氨酰异构酶和或蛋白质二硫键氧化还原酶。

主权项：1.一种在包含宿主细胞染色体的原核宿主细胞中产生包含两条链的多肽的方法，所述方法包括：a在适合于表达所述多肽的两条链的条件下在培养基中培养所述宿主细胞以表达所述多肽的两条链，从而在表达后所述两条链即折叠并组装以在所述宿主细胞中形成生物活性多肽，其中所述多肽是单臂抗体、半抗体或Fab；其中所述宿主细胞是内源蛋白酶活性不足的大肠杆菌菌株，且其中所述大肠杆菌菌株包含：1第一多核苷酸，其包含编码所述多肽的第一链的第一翻译单元；2第二多核苷酸，其包含编码所述多肽的第二链的第二翻译单元，其中所述第一多核苷酸和所述第二多核苷酸是一个或多个染色体外多核苷酸的一部分；3第三多核苷酸，其包含编码蛋白质二硫键氧化还原酶的第三翻译单元，其中所述第三翻译单元是所述宿主细胞染色体的一部分，其中所述第三翻译单元与整合在所述宿主细胞染色体中并驱动所述第三翻译单元转录的第一启动子可操作地组合，并且其中所述第三翻译单元和所述第一启动子的组合对于所述宿主细胞染色体是非天然的；和4第四多核苷酸，其包含编码肽基脯氨酰异构酶的第四翻译单元，其中所述第四翻译单元是所述宿主细胞染色体的一部分，其中所述第四翻译单元与整合在所述宿主细胞染色体中并驱动所述第四翻译单元转录的第二启动子可操作地组合，并且其中所述第四翻译单元和所述第二启动子的组合对于所述宿主细胞染色体是非天然的；以及b从所述宿主细胞中回收所述生物活性多肽，其中所述蛋白质二硫键氧化还原酶是大肠杆菌DsbC，所述第一启动子是当所述培养基中的磷酸盐耗尽时驱动所述第三翻译单元转录的PhoA启动子，所述肽基脯氨酰异构酶是大肠杆菌FkpA，并且所述第二启动子是CP25启动子；或所述蛋白质二硫键氧化还原酶是大肠杆菌DsbC，所述第一启动子是当所述培养基中的磷酸盐耗尽时驱动所述第三翻译单元转录的PhoA启动子，所述肽基脯氨酰异构酶是大肠杆菌FkpA，并且所述第二启动子是当所述培养基中的磷酸盐耗尽时驱动所述第四翻译单元转录的PhoA启动子。

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百度查询： 豪夫迈·罗氏有限公司 在原核宿主细胞中产生双链蛋白质的方法