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申请/专利权人：广州市东鹏食品饮料有限公司

摘要：本发明属于微生物及其酶的应用领域，具体涉及一种益生菌复合发酵组合物及其制备方法。本发明的凝结芽孢杆菌工程菌株能在较高温度下对柑橘皮进行发酵，实现部分脱苦，小麦经贝莱斯芽孢杆菌处理后，获得较多的小分子肽物质，有助于遮蔽苦味改良口感，发酵过程优化后，确保最大程度对柑橘皮进行开发利用，也尽可能避免产物限制导致生产效果不佳。本发明对凝结芽孢杆菌工程菌株作固定化处理，其中采用荷叶炭对海藻酸钙进行掺杂改性，具有提升强度、增加孔隙度、吸附色素的效果，且适当添加能与柑橘皮良好配合，提升风味舒缓药性。本发明缩短了柑橘皮陈化时间、保留柑橘皮的药用特性，所获益生菌复合发酵组合物，风味较佳，苦味不显，应用场景广泛。

主权项：1.一种益生菌复合发酵组合物，其特征在于，所述益生菌复合发酵组合物是采用贝莱斯芽孢杆菌及固定化凝结芽孢杆菌工程菌株对以下质量份数的原材料进行处理获得：6-8份小麦、12-16份柑橘皮；所述固定化凝结芽孢杆菌工程菌株的制备方法如下：V1.对凝结芽孢杆菌进行改造，获得凝结芽孢杆菌工程菌株；V2.将荷叶煅烧，去离子水清洗，干燥后研磨过筛，获得荷叶炭，将荷叶炭与海藻酸钙、水按质量比1：8-10：3-5混合，加热持续搅拌，获得混合物1，将混合物1与纳米结晶纤维素、聚乙烯醇、水按照质量比1：0.1-0.15：2-4：8-10混合，常温环境搅拌均匀并高温灭菌后获得混合物2；V3.将步骤V1所获凝结芽孢杆菌工程菌株接种于培养基中，获得凝结芽孢杆菌工程菌溶液，按照质量比1：6-9将凝结芽孢杆菌工程菌溶液与步骤V2所获混合物2混合，获得混合物3；V4.将葡萄糖酸钙溶于硼酸饱和溶液中，获得质量百分比浓度为2-3%的葡萄糖酸钙溶液，高温灭菌，将步骤V3所获混合物3滴加至葡萄糖酸钙溶液中，将形成的悬浮微球取出，蒸馏水清洗，即获得固定化凝结芽孢杆菌工程菌株；步骤V1包含以下步骤：V1-1.获取编码protein_id为AGL50002.1的蛋白质的基因序列，基因序列如SEQIDNO.1所示，设计引物片段，PCR扩增获得扩增的DNA的PCR产物，获取质粒PP151，扩增的DNA的PCR产物与质粒PP151双酶切后连接，获得重组质粒；V1-2.将步骤V1-1获得的重组质粒线性化，电穿孔转化到凝结芽孢杆菌中，获得凝结芽孢杆菌工程菌株；步骤V1-1中双酶切选用speI与DraI限制性核酸内切酶；步骤V1-2中线性化优选AccI限制性核酸内切酶，凝结芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌GBI30，6086菌株。

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