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申请/专利权人：昆明理工大学

摘要：本发明公开了一种阳离子纳米酶检测细菌内毒素的方法，该方法通过一步水热法或微波法合成铜、铁掺杂阳离子纳米酶，该纳米酶具有类过氧化物酶及类漆酶活性，一方面类过氧化物酶催化H2O2产生羟基自由基·OH，另一方面纳米酶表面带正电荷与带负电荷的细菌内毒素有效结合，增大了其与细菌内毒素的亲和力，纳米酶氧化底物时，细菌内毒素增强了纳米酶氧化底物及H2O2体系催化能力，且细菌内毒素浓度与吸光度增加呈线性关系，本发明方法检出限为0.0001EUmL，检测时间仅需要10min。将本方法应用于药品及生物制品中细菌内毒素的检测分析；方法具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速等特点。

主权项：1.一种阳离子纳米酶检测细菌内毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：1将0.3-0.5g柠檬酸、多巴胺0.1-0.3g、0.3-1.0g阳离子化合物、0.35-0.45gFeCl3、0.35-0.45gCuCl2、0.1-0.2g肝素钠加入到1％乙酸溶液30-50mL中，超声处理20-30min，再加入50-100μL乙二胺，将该混合溶液转移至高压反应釜中，在微波、170-190℃下反应1-2h；或将该混合溶液转移至高压反应釜中，置于马弗炉180-200℃反应8-10h，反应完成后自然冷却至室温，用0.22μm滤膜除去大颗粒杂质，再经高速离心，取上清液真空干燥，得到铜、铁掺杂阳离子纳米酶；2分别在含不同浓度细菌内毒素的溶液中加入铜、铁掺杂阳离子纳米酶溶液，孵育10-15min后，加入纳米酶底物、H2O2、pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲溶液或pH7.0磷酸-磷酸纳缓冲溶液，混匀，静置5-10min，测定吸光度，建立吸光度与细菌内毒素浓度的定量关系，绘制标准曲线，得到回归方程；纳米酶底物选自3,3',5,5'-四甲基联苯胺、2,2-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸、2,4-二氯酚和4-氨基安替比林；3在样品测定液中加入铜、铁掺杂阳离子纳米酶溶液，孵育10-15min，加入纳米酶底物、H2O2、pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲溶液或pH7.0磷酸-磷酸纳缓冲溶液，混匀，静置5-10min，测定吸光度，吸光度代入步骤2回归方程中，获得样品中细菌内毒素含量。

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