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申请/专利权人：成都赛济元生物医药有限公司

摘要：本发明涉及定向分化淋巴造血前体细胞的小分子组合、试剂盒及方法，涉及分子生物学领域。所述的培养体系包括成球培养基、中胚层诱导培养基、造血内皮细胞诱导培养基、造血干祖细胞诱导培养基和淋巴造血前体细胞诱导培养基。本发明通过精确调控培养基组分和生长因子的配方，确保了细胞在诱导过程中获得充分的营养和信号，从而提高了分化效率和稳定性。采用了全程悬浮培养，模拟了体内的三维环境，避免了细胞形态改变和应力的问题，同时提高了细胞的稳定性和生长速率。因此，本发明为多能干细胞分化为淋巴造血前体细胞提供了更可靠和高效的解决方案，为血液系统疾病的治疗和组织工程学的应用带来了新的希望。

主权项：1.iPSC定向分化淋巴造血前体细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）第一阶段，成球培养：采用成球培养基对多能干细胞进行悬浮静置培养1天，形成拟胚体；（2）第二阶段，向中胚层分化：采用中胚层诱导培养基对所述拟胚体进行诱导分化，悬浮静置培养1-2天，形成中胚层细胞；（3）第三阶段，中胚层细胞向造血内皮细胞分化：采用造血内皮细胞诱导培养基对所述中胚层细胞进行诱导分化，悬浮静置培养2-4天，形成造血内皮细胞；（4）第四阶段，造血内皮细胞向造血干祖细胞分化：采用造血干祖细胞诱导培养基对所述造血内皮细胞进行诱导分化，悬浮静置培养5-7天，形成造血干祖细胞；（5）第五阶段，造血干祖细胞向淋巴造血前体细胞分化：采用淋巴造血前体细胞诱导培养基对所述造血干祖细胞进行诱导分化，悬浮静置培养7-21天，形成淋巴造血前体细胞；所述淋巴造血前体细胞表达CD45、CD3、CD4，不表达CD8；所述成球培养基包括以下用量的组分：mTeSRPlus培养基、1-20μMY27632；所述中胚层诱导培养基包括以下用量的组分：1640完全培养基、1-100ngmLBMP4、1-12μMCHIR99021；所述造血内皮细胞诱导培养基包括以下用量的组分：1640完全培养基、5-100ngmLVEGF、1-25ngmLBMP4、10-250ngmLFGF2、2-50μMSB431542；所述造血干祖细胞诱导培养基包括以下用量的组分：IMDM完全培养、1-25ngmLBMP4、2-50ngmLVEGF、15-60μMNAC、1-4μMMinocycline、4-100ngmLSCF、2-50ngmLFLT3L、2-50ngmLIL-15、2-50ngmLIL-7、1-25ngmLIL3；所述淋巴造血前体细胞诱导培养基包括以下用量的组分：IMDM完全培养、1-25ngmLBMP4、2-50ngmLVEGF、15-60μMNAC、1-4μMMinocycline、10-100nMUM171、5-20μMSR1、4-100ngmLSCF、2-50ngmLFLT3L、2-50ngmLIL-15、2-50ngmLIL-7。

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