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申请/专利权人:陈呈尧
摘要:本发明提供一种以酵素合成及获取多核苷酸的方法及试剂盒,其包括具有自由3’‑羟基的启动子;用于将核苷酸单体并入启动子以从自由3’‑羟基形成核酸链的聚合酶,其中所述核酸链包括将被核酸内切酶辨识的引导核苷酸guidingnucleotide;且核酸内切酶切割核酸链以释放预定的多核苷酸并在剩余的核酸链的3’末端新形成自由3’‑羟基,所述剩余的核酸链作为可再使用的启动子。也提供用于使用所述方法合成及获取多核苷酸的试剂盒。
主权项:1.一种以酵素合成多核苷酸的方法,其特征在于,包含:提供启动子,其包含具有自由3’-羟基的3’-末端核苷酸;借由聚合酶并入核苷酸单体至所述启动子,以从所述自由3’-羟基延长核酸链,其中,所述核苷酸单体包含将被核酸内切酶辨识的引导核苷酸,致使所述引导核苷酸在所述核酸链的特定位置被并入;以及使所述核酸内切酶根据所述引导核苷酸的位置切割所述核酸链,以释放预定的多核苷酸,并保留具有新自由3’-羟基的剩余核酸链,其中,所述核酸内切酶专一性地辨识所述引导核苷酸,并在所述引导核苷酸3’方向的第二个磷酸二酯键、所述引导核苷酸5’方向的第一个磷酸二酯键、所述引导核苷酸5’方向的第二个磷酸二酯键或所述引导核苷酸5’方向的第三个磷酸二酯键切割,致使获得所述预定的多核苷酸,且具有所述新自由3’-羟基的所述剩余核酸链保留并作为用于另一轮多核苷酸合成的新启动子。
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