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摘要:本发明涉及三重MIRA引物、检测方法以及试剂盒,属于弧菌检测技术领域。本发明解决的技术问题是提供检测哈维氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血性弧菌的三重MIRA引物、MIRA检测方法、试剂盒以及结合测流层析试纸条的检测方法。本发明三重MIRA引物的核苷酸序列包括哈维氏弧菌正向引物V.h‑F5和反向引物V.h‑R4;溶藻弧菌正向引物V.a‑F3和反向引物V.a‑R2;副溶血性弧菌正向引物V.p‑F4和反向引物V.p‑R1。采用该引物,可同时定性哈维氏弧菌、溶藻弧菌和副溶血性弧菌。本发明三重MIRA检测方法同时检测多目标,且不依赖于昂贵仪器设备,在37℃恒温设备甚至将样品握在手里维持稳定温度即可完成对目的基因的扩增;方法操作简便、90min内即可完成检测、检测结果准确、特异性好、稳定性强、灵敏度高。
主权项:1.三重MIRA引物,其特征在于,所述三重MIRA引物为同时检测哈维氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血性弧菌的引物,其核苷酸序列如下:哈维氏弧菌正向引物V.hF5:5’-CATTCTCGGCATCCTAGCTGTTGTTGCAGC-3’;哈维氏弧菌反向引物V.hR4:5’-CCACCATTGACTAACCATTGGCTTTGGGTA-3’;溶藻弧菌正向引物V.aF3:5’-CACTGACGTTGAAGAAACCGCTTCTGAACA-3’;溶藻弧菌反向引物V.aR2:5’-AATACGCAAACAGGAAGCAGCAGAGACAAA-3’;副溶血性弧菌正向引物V.pF4:5’-AACCTGCTTCTGATAACAATGACGCCTCTGC-3’;副溶血性弧菌正向引物V.pR1:5’-GCAATCACCTCCACTGGTAACGAGTCTTCTG-3’。
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