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申请/专利权人：北京金匙医学检验实验室有限公司;天津金匙医学科技有限公司;金匙智造(天津)医疗科技有限公司

摘要：本申请提供了一种使宏基因组文库片段大小集中的文库构建方法，所述方法使用优化的酶切消化法搭配反应增强液来构建文库体系，具有样本兼容性高和体系稳定性好等优势，能够提高文库定量准确性，提高混样均一性和数据均一性。

主权项：1.一种使宏基因组文库片段大小集中的文库构建方法，其特征在于，所述方法包括：1核酸提取：取感染宏基因组样本进行核酸提取；2文库构建：a、核酸片段化；b、接头连接；c、接头产物纯化；d、纯化产物扩增；所述a、核酸片段化步骤具体为：取一定起始量的核酸提取样本，加入片段化酶FEAEnzyme、EB洗脱液和反应增强液进行酶切反应；所述反应增强液中包括Tris-HCl、C6H5O7Na3、BSA、MgCH3COO2.4H2O、MgCl2、CaCl2、BaCl2、MnCl2、NaCl、KCl、Na2HPO4、KH2PO4和NH4H2PO4；所述反应增强液中主要成分浓度如下： 离子名称 离子终浓度 C6H5O7Na3 0.25-0.1mgmL Mg2+ 10-30mM Ca2+ 5-15mM Ba2+ 0.05-1.5mM Mn2+ 0.05-1.5mM Na+ 15-40mM K+ 0.1-0.5mM NH4+ 0.3-0.6mM BSA 0.075-0.15mgml 所述一定起始量的核酸提取样本为1-60ng的核酸提取样本；所述反应增强液终浓度为1-50nmol；所述酶切反应的温度为35-37℃，反应时间为15-20min；所述感染宏基因组样本选自肺泡灌洗液、血液、痰液和脑脊液；所述文库构建方法使片段大小保持在300-400bp范围内，使文库峰形稳定；所述文库构建是针对二代MGI测序平台的文库构建。

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