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申请/专利权人：山东博科生物产业有限公司

摘要：本发明属于体外诊断试剂领域，具体涉及一种髓过氧化物酶检测试剂盒，本发明的髓过氧化物酶检测试剂盒包括试剂R1、试剂R2、校准品和质控品，其中，在制备试剂R1中的胶乳微球时，添加了Fe3O4磁性纳米颗粒和氧化石墨烯颗粒，得益于氧化石墨烯高比表面积和表面活性基团，可以吸附羧基修饰聚苯乙烯与聚丙烯酸胶乳颗粒以及Fe3O4磁性纳米颗粒，降低了胶乳颗粒和Fe3O4磁性纳米颗粒的自我聚集程度，展现了良好的空间性与分散性，与鼠抗人MPO单克隆抗体相结合，形成稳固的复合体，实现了高灵敏度，宽线性范围的髓过氧化物酶检测试剂盒，而且可配合全自动生化分析仪使用。

主权项：1.一种髓过氧化物酶检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2、校准品和质控品；所述试剂R1包括缓冲液、表面活性剂、防腐剂；所述试剂R2包括缓冲液、包被抗体的胶乳颗粒、表面活性剂、分散剂、防腐剂；所述校准品包括缓冲液、髓过氧化物酶、牛血清蛋白、海藻糖、防腐剂；所述质控品包括缓冲液、髓过氧化物酶、牛血清蛋白、海藻糖、防腐剂；其中，所述包被抗体的胶乳颗粒的组分包括：鼠抗人MPO单克隆抗体、聚苯乙烯、聚丙烯酸、Fe3O4磁性纳米颗粒、氧化石墨烯；所述的髓过氧化物酶检测试剂盒，其特征在于，所述包被抗体的胶乳颗粒的制备方法如下：1采用羧基修饰聚苯乙烯与聚丙烯酸胶乳颗粒，直径为100～300um，使用活化的MES缓冲液悬浮共聚胶乳微球，制备浓度为0.5～2％wv的共聚胶乳微球悬浮液；2向微球悬浮液加入质量0.1％的Fe3O4磁性纳米颗粒、质量0.01％的氧化石墨烯、EDC，超声分散，20～30℃孵育15～20min，再次加入EDC，继续20～30℃孵育15～20min，得到孵育后的乳胶微球；3孵育后的乳胶微球静置30min，取上清液，去除未结合的Fe3O4磁性纳米颗粒和氧化石墨烯，并使用等体积的MES缓冲液进行清洗，得到微球悬浮液A；4用缓冲液溶解鼠抗人MPO单克隆抗体至浓度为0.1～0.5mgmL，将溶解后的溶液加入3中的微球悬浮液A，同时不断搅拌，20～30℃孵育4h；5向4最终得到的溶液中加入乙醇胺，持续搅拌并20～30℃孵育10～15min；6对5最终得到的溶液用磁铁进行吸附，离心，去除上清液，移除未结合的鼠抗人MPO单克隆抗体和乙醇胺，之后使用PBS缓冲液进行悬浮，得到包被抗体的胶乳颗粒。

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