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申请/专利权人：青海警官职业学院;敏学科技(广州)有限公司;青海省公安厅;西宁市公安局

摘要：本发明公开了一种中老年死者肺脏中硅藻的检测方法，本发明的前处理方法包括微波消解、第一次抽滤富集、超声脱附、重液分离、第二次抽滤富集以及镀膜处理总共六个步骤，经过这六个步骤的处理，可以有效分离提纯硅藻，减少杂质干扰，提高了硅藻回收率。本发明首次采用电镜‑光镜联用法，先用电镜扫描检测，利用扫描电镜分辨能力强、景深大的优点，避免硅藻漏检、误检；之后针对需进一步确认种类的硅藻，定位回溯，利用光镜的透视功能，通过观察上、下两个壳面的形态纹理特征，确认或修正电镜法检测结果，因此提高了检测准确度。本发明对提高硅藻检验在溺死诊断和溺死地点推断中的价值具有重要意义，应用前景良好。

主权项：1.一种中老年死者肺脏中硅藻的检测方法，其特征在于包括如下步骤：步骤一：中老年死者肺组织样品的前处理：1微波消解：a取1－3g肺组织置微波消解罐内；b加入1－10mL强酸；c密闭消解，参数设置为：5－10min内将微波功率由0升至300－1000W，保持该功率10－20min；或设置为：5－15min内将样品液由室温升至80－240℃，保持该温度10－20min；d结束消解，通风冷却，使消解罐外部温度降至30－50℃；e取出消解罐，加入10－50mL纯水以稀释消解液的酸度，得到组织消解液；2第一次抽滤富集：利用真空抽滤设备抽滤上述所得的组织消解液，然后继续加50－100mL纯水抽滤，以去除溶解性杂质并使滤膜表面接近中性；抽滤富集所使用的滤膜为透明膜，直径10－30mm，孔径为0.1－1.0μm；3超声脱附：取出滤膜，置于新的塑料管内，加纯水5－20mL，超声振荡5－20min，使硅藻脱附，然后去除滤膜；4重液分离：往上述得到的塑料管中，加入适量密度为1.8－2.4gmL的多钨酸钠重液，充分摇匀后，离心，出现分层后，用移液枪吸取上层液体移入新的离心管中；于原来的离心管中加适量多钨酸钠重液，重复上述步骤，把两次提取的样品合并在新的离心管中；5第二次抽滤富集：利用真空抽滤设备抽滤经4得到的样品液，之后继续加10－50mL纯水抽滤，以去除滤膜表面上的多钨酸钠重液；所使用的滤膜为透明膜，直径10－30mm，孔径为0.1－1.0μm；6镀膜处理：用碳导电胶带将步骤5所得的滤膜样品固定于由导电玻璃所制的玻片上，所述导电玻璃由氧化铟锡制成，利用真空镀膜设备在滤膜表面镀厚度为5－10nm的金膜或铂膜；步骤二：对前处理后的样品进行电镜和光镜联合检测：1第一步用电镜检测进行硅藻数量和种类的鉴定；2第二步用光镜确认1中硅藻种类鉴定是否有误；3基于1、2，在扫描电镜分析软件中，修正结果，统计硅藻的数量和种类。

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