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摘要：本发明实施例公开了一种基于生物膜干涉技术Bio‑LayerInterferometry，BLI检测病原生物凝集素与唾液酸乳糖亲和力方法的建立，本项目以弓形虫SABP1蛋白质为研究对象，建立检测方法。该方法包括：His‑SABP1重组蛋白质纯化；BLI再生条件的优化；BLI检测His‑SABP1重组蛋白质结合唾液酸乳糖的亲和力。本发明提供的方法步骤少、操作简单易学；仅需要1个小时就能完成检测，同时制备的探针可以重复使用5次以上，极大的节约了检测时间和检测成本。可实现多个样品例如8个样品的同时批量检测。本方法可以用于多种病原生物凝集素与唾液酸乳糖亲和力的分析，值得推广。
主权项：1.一种基于生物膜干涉技术（Bio-LayerInterferometry，BLI）检测病原生物凝集素与唾液酸乳糖亲和力方法的建立，其特征在于，包括：His-SABP1重组蛋白质纯化；BLI检测His-SABP1重组蛋白质结合唾液酸乳糖的亲和力；所述BLI检测His-SABP1重组蛋白质结合唾液酸乳糖的亲和力的方法包括：（1）传感器活化：将链霉亲和素（SA）生物传感器浸入PBS缓冲液中预湿至少10分钟；（2）唾液酸乳糖固化：将SA生物传感器浸入用PBS缓冲溶液稀释成浓度为2.4μM的唾液酸乳糖溶液中，固化180-900秒；（3）封闭：将固化完成的SA生物传感器浸入PBST-BSA缓冲液中封闭90-120秒；（4）样品检测及结果判断：将已封闭的SA生物传感器浸入待测样品中进行His-SABP1重组蛋白质结合唾液酸乳糖的亲和力检测，检测过程中实时读取结合信号；（5）将SA生物传感器浸入含有PBST-BSA溶液中，解离60秒；（6）将SA生物传感器浸入pH=0.5盐酸溶液进行传感器再生，重复步骤（3）-（6）；所述唾液酸乳糖为3′-唾液酸半乳糖聚丙烯酰胺生物素结合物或6′-唾液酸半乳糖聚丙烯酰胺生物素结合物。
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百度查询： 沈阳农业大学 基于生物膜干涉技术检测病原生物凝集素与唾液酸乳糖亲和力方法的建立
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