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申请/专利权人：重庆大学

摘要：本发明属于酶检测技术领域，公开了一种端粒酶表达丰度和活性综合检测技术的探针组合及其应用，该探针组合包括可形成发夹结构的启动探针、可与启动探针互补形成双链复合结构的端粒酶引物探针、可形成发夹结构的杂交链式反应探针和包括连接区、DNAzyme活性区和识别区的MNAzyme探针。探针组合用于端粒酶表达丰度和活性综合检测技术，通过探针预处理形成发夹结构探针和双链杂交茎环结构探针，进一步将探针负载于二氧化锰纳米材料，形成DNA‑MnO2复合物，利用荧光共聚焦成像，实现端粒酶的痕量检测，同步实现端粒酶表达丰度定量和端粒酶活性量化。本发明可用于高灵敏度、高特异性对细胞内端粒酶原位检测。

主权项：1.一种端粒酶表达丰度和活性综合检测技术的探针组合，其特征在于，该探针组合包括可形成发夹结构的启动探针、可与启动探针互补形成双链复合结构的端粒酶引物探针、可形成发夹结构的杂交链式反应探针和包括连接区、DNAzyme活性区和识别区的MNAzyme探针；其中，启动探针修饰有荧光基团和淬灭基团，且启动探针形成发夹结构后游离的单链端设计有与端粒酶引物探针互补的序列，所述与端粒酶引物探针互补的序列的碱基数为13～18；杂交链式反应探针修饰有FRET荧光基团对，由杂交链式反应探针H1和杂交链式反应探针H2组成；所述杂交链式反应探针具有结合端粒酶延伸产物形成杂交链式反应的立足点序列；MNAzyme探针由MNAzyme探针DC1和MNAzyme探针DC2组成，MNAzyme探针DC1的识别区与端粒酶延伸产物互补；MNAzyme探针DC2还具有与其识别区序列互补的端粒酶引物区；单链状态的启动探针具有与MNAzyme探针识别区互补形成MNAzyme结构的序列；所述探针组合中探针的序列分别为：①端粒酶引物探针TS：5’-AATCCGTCGAGCAGAGTT-3’；②启动探针H0：5’-FAM-AGGGTTAGGGAGCCTCAGCTCGAGTCCCTAACCCiDabcyldTAACTCTGCTCGACGGA-3’；③杂交链式反应探针H1：5’-Cy3-TAGGGTTAGGGCACGCACCCTAACCCiBHQ1dTAACCC-3’；④杂交链式反应探针H2：5’-TGCGTGCCCTAACCCiCy5dTAGGGTTAGGGTTAGGG-3’；⑤MNAzyme探针DC1：5’-ACCCTAACCTCCGAGCCTCCCTAACCCT-3’；⑥MNAzyme探针DC2：5’-CTCGAGCTGAGGCGGTCGAAAACTCTGCTCGACGGATTTTTTTTTTAATCCGTCGAGCAGAGTTrA-3’。

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权利要求：

百度查询： 重庆大学 端粒酶表达丰度和活性综合检测技术的探针组合及其应用