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申请/专利权人：泉州师范学院

摘要：本发明公开了基于SERS生物传感芯片的ctDNA突变基因检测试剂盒及其应用，涉及拉曼光谱检测技术领域。所述的试剂盒包括发卡DNA‑A链功能化的编码银包金纳米粒子和发卡DNA‑B链功能化的PDMS‑Ag芯片。本发明的技术思路为：制备具有自校准功能的PDMS@Ag二维凹槽基板，以种子法制备具有拉曼信号分子的金包银纳米粒子，然后根据ctDNA的突变序列设计相应的发卡DNA结构，并分别修饰在银包金纳米粒子和PDMS@Ag二维凹槽基板表面，得到DNA‑A链功能化的编码银包金纳米粒子和发卡DNA‑B链功能化的PDMS‑Ag芯片，以构建循环放大系统，实现对ctDNA突变基因的定量检测。本发明提供的SERS生物传感芯片具有高灵敏度、高特异性、高通量且无需酶的参与等优点，能够实现在复杂反应体系中快速检测一种或多种ctDNA突变。

主权项：1.基于SERS生物传感芯片的ctDNA突变基因检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括发卡DNA-A链功能化的编码银包金纳米粒子和发卡DNA-B链功能化的PDMS-Ag芯片，所述的发卡DNA功能化的编码银包金纳米粒子的制备方法为：在金纳米粒子溶液中加入拉曼标记分子并在室温下孵育，离心去除多余分子后以超纯水重悬得Au@ReporterNPs；将柠檬酸钠溶液、氢氧化钠溶液、硝酸银溶液和抗坏血酸溶液依次加入Au@ReporterNPs溶液中并持续搅拌，得到Au@Reporter@AgNPs；然后，依次加入发卡DNA-A链、PBS（1x）溶液、0.02M氯化钠溶液和0.1M氯化钠溶液，于4℃静置10-18h，离心后以PBS溶液重悬，得到发卡DNA-A链功能化的编码Au@Reporter@AgNPs；所述的发卡DNA-B链功能化的PDMS-Ag芯片的制备方法如下：将sylgard184试剂和固化剂的混合物浇铸到聚苯乙烯模具上，在80℃下加热1.5h，得带有正方形凹槽的PDMS芯片；将PDMS芯片在3-氨丙基三乙氧基硅烷溶液中浸泡12~14h，以超纯水和乙醇反复冲洗，室温下干燥得PDMS-APTES芯片；然后，将PDMS-APTES芯片在种子液中浸泡2~12h，使用超纯水清洗多余溶液后，放入生长液中浸泡0.5~4h，再次使用超纯水清洗后，室温下干燥得PDMS-Ag芯片；最后，将发卡DNA-B链、PBS（1x）溶液、0.02M氯化钠溶液和0.1M氯化钠溶液依次加入PDMS-Ag芯片的方形凹槽中，4℃10-18h，使用PBS溶液清洗凹槽，得发卡DNA-B链功能化的PDMS-Ag芯片。

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