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申请/专利权人：西门子医疗股份公司

摘要：本发明涉及一种使用用于sgRNA引导的核酸结合蛋白的合成的单一向导RNAsgRNA获得靶标多核苷酸的富集群体的方法，以及一种获得用于sgRNA引导的核酸结合蛋白的靶标无关的合成的单一向导RNAsgRNA的库的方法。还提供了一种通过本发明的方法可获得的靶标多核苷酸和sgRNA。进一步设想了一种包含通过本发明的方法可获得的sgRNA的库的试剂盒以及通过本发明的方法可获得的sgRNA的库的用途。

主权项：1.一种获得靶标多核苷酸的富集群体的方法，包括：i提供起始寡核苷酸的库，该起始寡核苷酸的库用于制备用于sgRNA引导的核酸结合蛋白的合成的单一向导RNA合成的单一向导RNAsgRNA的库，其中所述起始寡核苷酸包含启动子节段、作为靶标特异性序列的随机节段和结合节段，所述结合节段与支架序列的至少一部分互补以与sgRNA引导的核酸结合蛋白相互作用；ii提供一种或多种正义和或反义链捕捉子寡核苷酸，其与所述靶标特异性序列的至少一部分互补，包含能够结合同源相互作用子的标签；iii使所述起始寡核苷酸的库与所述一种或多种正义和或反义链捕捉子寡核苷酸杂交；iv通过使所述标签与同源相互作用子结合，所述同源相互作用子位于磁珠或适合的表面上，从所述起始寡核苷酸的库中去除起始寡核苷酸和正义链捕捉子寡核苷酸的复合物和或起始寡核苷酸和反义链捕捉子寡核苷酸的复合物，从而获得减少的起始寡核苷酸的库；v使用在步骤iv中获得的所述减少的起始寡核苷酸的库制备sgRNA的库；vi使用在步骤v中获得的所述sgRNA的库，以sgRNA引导的核酸结合蛋白切割从测试样品获得的多核苷酸混合物；和vii从在步骤vi中获得的所述多核苷酸混合物尺寸选择未切割的靶标多核苷酸；其中，所述捕捉子寡核苷酸包含10至30个核苷酸；并且其中，在方法步骤iii至iv的每次重复期间，使用表示一种或多种不同基因、外显子或开放阅读框的一种或多种捕捉子寡核苷酸；其中，方法步骤v包括：a将包含组合在sgRNA中的crRNA和tracrRNA功能的单链寡核苷酸通过存在于所述起始寡核苷酸中的结合元件与步骤iv中获得的起始寡核苷酸杂交；b通过DNA延伸反应填充杂合复合物的单链部分；c将所得的双链模板分子进行扩增；和d将模板转录成RNA分子，产生用于CRISPRCas活动的靶标特异性sgRNA；并且其中所述靶标特异性sgRNA包含靶标特异性序列和sgRNA支架节段。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 西门子医疗股份公司 用于CRISPR的靶标无关的向导RNA