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同时具有抑菌抑生物被膜活性的脂磷壁酸及其提取方法 

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申请/专利权人:扬州大学

摘要:本发明公开了一种同时具有抑菌抑生物被膜活性的脂磷壁酸及其提取方法。所述方法先采用搅拌法提取鼠李糖乳杆菌grx603表面具有抑菌活性的成分,再依次采用酸沉淀法纯化、有机溶剂萃取、透析、高效液相色谱分离进行纯化,获得鼠李糖乳杆菌grx603脂磷壁酸。本发明的脂磷壁酸具有广谱抑菌能力,且能够抑制枯草芽孢杆菌生物被膜的形成及破坏成熟的生物被膜,抑制生物被膜内细菌的代谢活力、降低生物被膜内细菌的活菌数及减少细菌胞外多糖的分泌,具有优异的抑菌抑生物被膜活性。

主权项:1.同时具有抑菌抑生物被膜活性的脂磷壁酸的提取方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)菌悬液的制备:将鼠李糖乳杆菌grx603发酵培养后,离心收集菌泥,PBS缓冲液清洗后,再用PBS缓冲液复溶;(2)摇床处理:将复溶的菌悬液摇床处理,离心收集上清液,上清液用0.22μm孔径的滤膜过滤,冷冻干燥,加水复溶,得到鼠李糖乳杆菌grx603菌体表面提取液;(3)酸沉淀纯化:将鼠李糖乳杆菌grx603菌体表面提取液用6000~8000Da透析膜室温透析,然后将透析液在55±5℃下旋蒸浓缩,自然冷却至室温,用盐酸调pH至2,4℃静置,离心,收集上清液,用氢氧化钠溶液将上清液调至原pH值,得到酸沉上清液;(4)萃取纯化:将酸沉上清液与等体积萃取液充分混匀,静置分层,收集水相,在45~50℃下旋转蒸发除去有机溶剂,冷冻干燥,所述的萃取液由体积比为2:1的氯仿和甲醇组成;(5)反相高效液相色谱纯化:将步骤(4)获得的冻干粉用超纯水复溶后经0.22μm水系滤膜过滤,滤液采用反相高效液相色谱进行纯化,流动相A为0.1%三氟乙酸乙腈溶液,流动相B为0.1%三氟乙酸水溶液,按下表进行梯度洗脱: ,收集保留时间2~7min内的馏分,重复上述反相高效液相色谱纯化过程2次,获得一个具有抑菌活性的单峰,收集该峰并通过旋转蒸发除去乙腈和三氟乙酸,冷冻干燥浓缩,获得脂磷壁酸纯化物。

全文数据:

权利要求:

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