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一种从贝莱斯芽孢杆菌分离环状脂肽Baelezcin A的方法 

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申请/专利权人:集美大学;山东省果树研究所

摘要:本发明公开了一种从贝莱斯芽孢杆菌分离环状脂肽BaelezcinA的方法,包括:将贝莱斯芽孢杆菌发酵,得到发酵液;将发酵液离心,收集上清液,再将上清液酸化,离心,收集沉淀;向洗涤后的沉淀加入甲醇萃取,得到脂肽粗提物AME;将AME用甲醇溶解,反向硅胶柱层析,得到AME‑4;将AME用甲醇溶解,羟丙基葡聚糖凝胶柱层析,得到AME‑4‑5;将AME‑4‑5用甲醇配置成溶液,并用高效液相色谱仪和C18柱纯化,得到化合物环状脂肽BaelezcinA。该方法简单易操作,所得到的环状脂肽BaelezcinA还未见报道,对于微生物天然产物有效成分的研究具有十分重要的意义。

主权项:1.一种从贝莱斯芽孢杆菌分离环状脂肽BaelezcinA的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)接种至发酵培养基中发酵,得到发酵液;所述贝莱斯芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNO.20398;(2)将发酵液离心去除菌体,收集上清液,再将上清液酸化,离心,收集沉淀,洗涤沉淀;(3)向洗涤后的沉淀加入甲醇萃取,萃取3次,每次12h,合并有机相,旋转蒸发去除有机相溶剂,得到脂肽粗提物AME;(4)将脂肽粗提物AME用甲醇溶解,反向硅胶柱层析,按照25%,50%,75%和100%甲醇的甲醇-水洗脱,流速设定为10mLmin,每个体系收集5管,每管200mL;将收集的第四个体系100%甲醇组分的前两管,通过旋转蒸发去除有机相溶剂,得到提取物AME-4;(5)将提取物AME-4用甲醇溶解,羟丙基葡聚糖凝胶柱层析,设置程序为:15~20sdrop,每30min接一个试管,共接了200个试管,将200个试管切成8个组分,再将第五个组分收集,通过旋转蒸发去除有机相溶剂,得到提取物AME-4-5;(6)将提取物AME-4-5用甲醇配置成溶液,并用高效液相色谱仪和C18柱纯化,进样量为100μL,采用1mLmin的66.0%乙腈水,加0.1%三氟乙酸洗脱,用210nm波长检测;收集33~37min的大峰,得到化合物环状脂肽BaelezcinA;环状脂肽BaelezcinA的结构式如下: 。

全文数据:

权利要求:

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