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申请/专利权人：吉林大学
摘要：本发明适用于生物工程技术领域，提供了基于基质硬度建立结肠癌肿瘤静止细胞（CQCs）三维模型的方法。通过高压蒸汽灭菌处理Alginate并配置溶液，与Matrigel和细胞悬液混合后，加入CaCO3悬浊液调节硬度，最终在特定条件下培养形成肿瘤球体。本发明构建出均一透明、凝胶时间可控且环境温和、适合细胞生长的三维细胞培养体系，为体外三维CQCs模型的建立提供了新的可能；本发明实现了对从健康结肠组织到结肠癌组织硬度的广泛覆盖，能够更真实地模拟体内环境，且提升了模型的稳定性；本发明首次发现并证明了硬基质能够促进结肠癌细胞球体中CQCs样特性的产生，为肿瘤转移和复发机制提供了新的视角和依据。
主权项：1.基于基质硬度建立结肠癌CQCs三维模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、选用Alginate钠盐粉末，通过高压蒸汽灭菌处理，条件为蒸汽压103.4kPa，温度121.3℃，持续30min；灭菌后烘干，加入无菌超纯水，配置成质量分数为2%的溶液；在90℃下搅拌4h，直至溶液澄清，然后冷却至室温，并在4℃下储存备用；Matrigel于4℃过夜至液态；步骤2、复苏结肠癌细胞系，进行贴壁培养和细胞传代，在传代2次后，待细胞生长达80％融合状态时进行消化处理，以1000rpm的转速离心5min以收集细胞；用DMEM培养基调整细胞浓度为1×104个mL，得到细胞悬液；将一50ml无菌离心管置于冰水混合物中，将细胞悬液、Matrigel及Alginate在离心管中混匀；步骤3、吸取CaCO3悬浊液加入到步骤2得到的混合溶液中，通过调整CaCO3悬浊液的加入量，使Ca2+终浓度分别达到7.5mM或15mM，以形成软基质或硬基质；步骤4、将混合后的溶液置于37℃环境中孵育30min，等待完全交联；交联完成后，加入完全培养基，在37℃，5%CO2环境中培养7天，直至形成直径50μm的肿瘤球体，进行后续实验。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 吉林大学 基于基质硬度建立结肠癌肿瘤静止细胞三维模型的方法
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