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申请/专利权人:温州医科大学附属第一医院
摘要:本发明提供一种CRISPR‑Cas12突变耐药基因检测方法及应用,适用于结核分枝杆菌耐药基因附近存在天然PAM的基因位点,包括用于结核分枝杆菌耐药基因高效扩增的巢式PCR引物组和sgRNA。本CRISPR‑Cas12体系可用于制备检测或辅助检测耐多药结核分枝杆菌的利福平耐药性试剂盒,方便进行包括结核分枝杆菌常见耐药基因,例如rpoB基因的耐药突变位点检测,降低检测成本,具有良好的应用前景。
主权项:1.一种针对结核分枝杆菌rpoB基因突变的检测试剂盒,其包括:巢式PCR扩增体系和CRISPR-Cas12体系;其中,巢式PCR扩增体系包括扩增引物组,所述引物组序列包括:TB-1F:CCGACGACATCGACCACTT(SEQIDNO:1);TB-1R:GGTACGGCGTTTCGATGAAC(SEQIDNO:2);TB-2F:ACGTGGAGGCGATCACA(SEQIDNO:3);TB-2R:AGCCGATCAGACCGATGTT(SEQIDNO:4);其中,CRISPR-Cas12体系包括CRISPR-Cas12核酸酶、sgRNA-516和或sgRNA-526;其中sgRNA-516选自:UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUUGGUCCAUGAAUUGGCUCAGCUGG(SEQIDNO:5);UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUUGGUCCAUGAAUUGGCUCAGCUG(SEQIDNO:6);或UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUUGGUCCAUGAAUUGGCUCAGCU(SEQIDNO:7);sgRNA-526选自:UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUACCCACAAGCGCCGACUGUCGGCG(SEQIDNO:8);UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUACCCACAAGCGCCGACUGUCGGC(SEQIDNO:9);或UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUACCCACAAGCGCCGACUGUCGG(SEQIDNO:10)。
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百度查询: 温州医科大学附属第一医院 针对结核分枝杆菌rpoB基因突变的CRISPR-Cas12检测方法及应用
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