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申请/专利权人:山东立菲生物产业有限公司
摘要:本申请涉及单克隆抗体技术领域,具体公开一种抗p‑Tau181抗体及其制备方法与应用。抗p‑Tau181抗体的制备方法包括:以一段p‑Tau181多肽IPAKTPPAPKpTPPSSGEPPK为免疫原,将免疫原注入实验动物体内进行免疫反应,获取实验动物的脾淋巴细胞;取骨髓瘤细胞与脾淋巴细胞混合培养,得到融合细胞;将融合细胞进行培养,取得上清液进行ELISA检测,检测用的多肽为p‑Tau181多肽,取检测结果为阳性的杂交瘤细胞株用p‑Tau217多肽、p‑Tau231多肽及t‑tau蛋白进行反筛,筛选对p‑Tau181多肽有反应并且对p‑Tau217多肽、p‑Tau231多肽及t‑tau蛋白均无反应的阳性克隆,进行多次克隆化筛选,得到每次均能分泌抗体的杂交瘤细胞株,取得杂交瘤细胞株分泌的抗体为抗p‑Tau181抗体。该抗p‑Tau181抗体可以和p‑Tau181特异性结合,因而能用于检测阿尔茨海默病。
主权项:1.一种抗p-Tau181抗体的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括:免疫步骤:以一段p-Tau181多肽IPAKTPPAPKpTPPSSGEPPK为免疫原,将所述免疫原注入实验动物体内进行免疫反应,获取实验动物的脾淋巴细胞;细胞融合步骤:取骨髓瘤细胞与所述脾淋巴细胞混合培养,得到融合细胞;在所述融合细胞之中添加培养液进行培养,获得初培液;细胞筛选步骤:取得所述初培液的上清液进行ELISA检测,检测用的多肽为p-Tau181多肽,取检测结果为阳性的杂交瘤细胞株用p-Tau217多肽、p-Tau231多肽及t-tau蛋白进行反筛,筛选对所述p-Tau181多肽有反应并且对p-Tau217多肽、p-Tau231多肽及t-tau蛋白均无反应的阳性克隆,进行多次克隆化筛选,得到每次均能分泌抗体的杂交瘤细胞株,取得所述杂交瘤细胞株分泌的抗体为所述抗p-Tau181抗体。
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