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申请/专利权人:国家海洋局东海环境监测中心(国家海洋局东海海洋工程勘察设计研究所);上海市生物医药技术研究院
摘要:本发明公开了一种绿潮暴发预警的分子检测方法,基于绿潮暴发早期四种石莼属绿潮藻非核基因组高度保守区开发引物并利用绝对定量PCR技术确定绿潮藻基因组DNA浓度与Ct值的关系,实现快速定量海水中的绿潮藻。对含有绿潮藻的海水可进行分子检测,实现快速定量海水中的绿潮藻,包括如下步骤:S1.引物设计;S2.样品采集和保存;S3.基因组DNA提取;S4.DNA浓度检测及质量控制;S5.制备DNA浓度梯度标准品;S6.PCR扩增;S7.绝对定量PCR检测等。本发明创新性地运用先进的分子技术,在绿潮暴发初期,对海水样本进行分子检测,实现了对海水中绿潮藻含量的快速分析,有效提升了绿潮预警与监测的效率与准确性。
主权项:1.一种绿潮暴发预警的分子检测方法,其特征在于,基于引起绿潮暴发的四种石莼属绿潮藻的非核基因组开发引物,并利用绝对定量PCR技术确定绿潮藻基因组DNA浓度与Ct值的关系,实现速定量海水中的绿潮藻,在绿潮暴发早期,对含有绿潮藻的海水可进行分子检测,实现快速定量海水中的绿潮藻,具体包括如下步骤:S1.引物设计;S2.样品采集和保存;S3.基因组DNA提取;S4.DNA浓度检测及质量控制;S5.制备DNA浓度梯度标准品,以步骤S3得到的最高浓度DNA提取产品为起始标准品,制作7个DNA浓度梯度100、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6的标准品;S6.PCR扩增;S7.绝对定量PCR检测;S8.平行样和阴性对照;S9.候选引物筛选;S10.引物检出限测定;S11.基因组DNA浓度与Ct值标准曲线的建立;S12.绿潮藻湿重与基因组DNA浓度标准曲线的建立;S13.记录与计算。
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