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申请/专利权人：中国科学院西北高原生物研究所

摘要：本发明公开了一种紫花苜蓿单作种植对土壤影响的试验方法，属于农业技术领域，主要包括：采样地选取及采样方法设计；土壤理化性质检测并分析紫花苜蓿种植对土壤养分含量的影响；根际土壤DNA提取及IlluminaMiSeqDNA测序；根据测序得到的结果分析紫花苜蓿种植对土壤真菌群落特征的影响。本发明一方面提供土壤养分含量的测定方法并分析紫花苜蓿种植对土壤养分含量的影响，另一方面通过非加权组平均法聚类和典范对应分析等手段，解析紫花苜蓿种植区土壤真菌群落的差异，同时研究土壤真菌群落同土壤养分的交互作用，为优化青藏高原地区紫花苜蓿管理和提高土壤肥力提供了科学依据。

主权项：1.一种紫花苜蓿单作种植对土壤影响的试验方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、采样地选取及采样方法设计：在不同区域选取采样地，在所述采样地上种植紫花苜蓿；在第二年于紫花苜蓿生长季盛期采集1m2采样地上生物量，同时，在采样地内按随机取样法采集紫花苜蓿根际土壤，在相邻地块紫花苜蓿未生长区域采集对照土壤，每采样地采集土壤三份，将采集后的土壤过2mm筛后分为两部分，一部分装入土样袋中存于4℃冰箱中用于土壤理化性质检测，另一部分装入塑封袋中于-80℃保存用于微生物多样性检测；S2、土壤理化性质检测并分析紫花苜蓿种植对土壤养分含量的影响：采用电位法测定土壤pH，通过TOC仪测定土壤全碳含量，通过重铬酸钾氧化法测定土壤有机碳含量，采用凯氏定氮法测定总氮含量，采用碱解扩散法测定总氮含量，采用钼锑抗比色法测定总磷和速效磷含量，基于分光光度法测定全钾和速效钾含量；S3、根际土壤DNA提取及IlluminaMiSeqDNA测序；S4、根据测序得到的结果分析紫花苜蓿种植对土壤真菌群落特征的影响：在R语言中使用vegan包计算微生物群落的α多样性，同时进行典范对应分析以反映真菌群落同环境因子间的关系，并通过rdacca.hp包划分单个环境因子对真菌群落的效应，使用randomForest包通过十折交叉验证构选取关键属类微生物进行随机森林预测对土壤速效养分的相对重要性，通过Miceco包对真菌群落进行了中性群落模型的拟合，使用agricolae包进行组间的多重比较。

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