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申请/专利权人：南京鼓楼医院

摘要：进入外周循环中的药物会大部分与血液中的蛋白结合，是制约引物进入目标器官及细胞发挥治疗功能的关键因素。因此，全面检测外周血血浆中的蛋白是研究药物在体内代谢过程及其疗效的重要措施，而目前血浆蛋白的全面检测主要通过质谱分析，但该技术会受到血浆中高丰度的干扰，这一直是国内外领域内的难题。本发明公开了一种血浆中蛋白的质谱检测前处理方法。本发明通过聚乙二醇6000有效沉淀血浆中的球蛋白等高峰度蛋白，再利用汽巴蓝凝胶柱分离出血浆中的白蛋白成分，然后对这些分离出的各组分分别通过反式液相层析进行层析分馏，最后利用液相色谱‑质谱联用仪进行质谱检测蛋白进行质谱检测。通过该方法，可将蛋白的检测数量有效的提高38.3％，极大提高了检测深度，可为药物代谢及疗效研究提供更加全面的实验室依据。

主权项：1.一种血浆中蛋白的质谱检测前处理方法，其特征在于，包括如下步骤：1聚乙二醇沉淀血浆、去白蛋白：将血浆样本与表面活性剂混合，再加入聚乙二醇沉淀血浆得到第一混合液；将所述的第一混合液离心，得到沉淀A和上清A；取部分所述的上清A经白蛋白去除离心小柱离心去除白蛋白，得到上清滤过液A；另取部分所述的上清A继续加入聚乙二醇沉淀血浆得到第二混合液；所述的第二混合液离心，得到沉淀B和上清B；将所述的上清B经白蛋白去除离心小柱离心去除白蛋白，得到上清滤过液B；2样品沉淀：将血浆样本与无水乙腈混合进行沉淀，收集沉淀C；将所述的上清滤过液A和所述的上清滤过液B分别加入三氯乙酸进行沉淀，分别离心，分别洗涤沉淀，再分别离心得到沉淀D和沉淀E；3蛋白酶解、还原烷基化：将所述的沉淀B、所述的沉淀C、所述的沉淀D、所述的沉淀E分别依次进行蛋白酶解处理、蛋白还原处理、蛋白烷基化处理、猝灭反应处理，得到肽段样品；4肽段脱盐：将步骤3得到的肽段样品上样至脱盐柱中，使用脱盐清洗液进行脱盐洗涤，随后再加入脱盐洗脱液进行洗脱，收集含有肽段的洗脱液，经干燥得到脱盐的肽段；5碱性条件进行反式液相层析分馏：将步骤4得到的脱盐的肽段通过反式液相层析进行层析分馏，收集得到的各肽段馏分进行干燥；6质谱检测及蛋白鉴定：将步骤5分馏收集得到的肽段样品进样液相色谱-质谱联用仪中进行质谱检测；使用蛋白数据库分析质谱原始数据。

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