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申请/专利权人：豪夫迈·罗氏有限公司

摘要：本文报道了包含第一蛋白质性部分和第二蛋白质性部分的异二聚体融合多肽，其中所述第一蛋白质性部分和所述第二蛋白质性部分是双特异性抗体的第一抗原和第二抗原，所述双特异性抗体包含与所述第一蛋白质性部分特异性结合的第一结合位点和与所述第二蛋白质性部分特异性结合的第二结合位点，其中所述第一蛋白质性部分融合到IgG1亚型的第一抗体重链Fc区多肽的N末端，其中所述第二蛋白质性部分融合到IgG1亚型的第二抗体重链Fc区多肽的N末端，其中所述第一重链Fc区多肽和所述第二重链Fc区多肽形成二硫键连接的异二聚体，其中所述重链Fc区多肽中的一者或两者在其C末端包含用于固定到固相的标签，并且其中所述第一Fc区多肽和所述第二Fc区多肽分别包含突变T366W和T366SL368AY407V；以及所述融合多肽用于在表面等离子体共振方法中确定双特异性抗体对第一抗原和第二抗原的基于亲合力的结合强度的用途，所述双特异性抗体包含与所述第一抗原特异性结合的第一结合位点和与所述第二抗原特异性结合的第二结合位点。

主权项：1.一种用于确定至少二价双特异性抗体对其第一抗原和第二抗原的基于亲合力的结合强度的方法，所述方法包括-根据表面等离子体共振信号确定所述二价双特异性抗体的所述基于亲合力的结合强度，所述表面等离子体共振信号通过以下获得a在表面等离子体共振芯片上捕获第一抗原-第二抗原融合多肽并确定第一表面等离子体共振响应，b向步骤a的表面等离子体共振芯片施加包含至少双特异性结合物的溶液以形成捕获的第一抗原-第二抗原融合多肽-双特异性结合物复合物并确定第二表面等离子体共振响应，c从第一和第二表面等离子体共振响应之间的差异计算所述至少双特异性结合物对第一和第二抗原的基于亲合力的结合强度，其中在一个末端包含所述第一抗原并且在不同的第二末端包含所述第二抗原的所述第一抗原-第二抗原融合多肽是缀合的，其中所述至少二价双特异性抗体包含与第一抗原特异性结合的第一结合位点和与不同的第二抗原特异性结合的第二结合位点，其中第一抗原-第二抗原融合多肽是包含第一多肽和第二多肽的异二聚体多肽，所述第一多肽是所述第一抗原和包含第一组异二聚化突变的第一抗体重链Fc区多肽的融合多肽，所述第二多肽是所述第二抗原和包含第二组异二聚化突变的第二抗体重链Fc区多肽的融合多肽，所述第二组异二聚化突变与所述第一组异二聚化突变互补，其中所述第一抗原和所述第二抗原在相应的所述第一抗体重链Fc区多肽或所述第二抗体重链Fc区多肽的N末端，其中在一个末端包含所述第一抗原并且在不同的第二末端包含所述第二抗原的每个第一抗原-第二抗原融合多肽分别与表面等离子体共振芯片缀合，其中第一抗原与第二抗原不同。

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