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申请/专利权人：昆明理工大学
摘要：本发明涉及原代细胞培养技术领域，具体涉及一种简便高效的海马原代神经元分离培养方法，基于不同细胞贴壁速度的差异性，通过翻转培养瓶+两次全换液的简单操作即可得到90％以上纯度的海马神经元；在胰酶消化后的制备单细胞悬液过程中，采用40μm筛网过滤去除杂质细胞，随后通过800rpmmin离心，进一步去除非神经元细胞。在培养1.5小时后，通过翻转T25培养瓶收集上清，丢弃贴壁的非神经元细胞，并倍比稀释计算细胞密度，将细胞液铺于预处理好的6孔板中，再次通过3小时培养和全换液，最终成功获得高纯度神经元。该方法简单高效，同时无需使用有可能影响实验结果的阿糖胞苷，确保了所获细胞的高纯度和高活力。
主权项：1.一种简便高效的海马原代神经元分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：胎鼠脑组织解剖，将预处理后的胚胎转入提前预冷的高糖DMEM培养基；S2：将步骤S1所得胎鼠分离获得海马组织制备海马单细胞悬液；将海马组织剪碎，静止沉淀后弃上清并加入0.125％胰酶吹打混匀后转入一次性平皿并置于培养箱消化10min，期间取出平皿摇晃1次；加入等量完全培养基终止消化，吹打后将组织及上清转入15mL离心管，静止沉淀后吸取上清于新离心管，组织沉淀再次加入0.125％胰酶重复消化1-2次并收集全部细胞上清；所有细胞上清经40μm筛网过滤制备单细胞悬液后再转入新15mL离心管，800rpmmin离心3min后弃上清，加入分离培养基重悬细胞沉淀后转入T25培养瓶于培养箱培养；S3：基于步骤S2所得海马单细胞悬液培养获得海马原代神经元；培养1.5小时后，翻转T25瓶将细胞上清收集于新15mL离心管，视细胞量倍比稀释后计算细胞密度；按照60万孔将细胞液铺于多聚赖氨酸提前包被好的6孔板爬片，并用分离培养基补足至2mL再转入培养箱；培养3小时后弃上清，添加维持培养基2mL孔继续培养，24小时后再次用维持培养基全换液，后续每2-3天半换液一次；S4：对步骤S3所得海马神经元纯度鉴定，计算神经元纯度。
全文数据：
权利要求：
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