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申请/专利权人：云南伦扬科技有限公司

摘要：本发明公开了一种FePDA‑Au‑janusAg@AuNPs结合适配体双模式快速检测丙烯酰胺的方法，该方法合成了Au‑AgJanus纳米颗粒，进一步用硼氢化钠还原制备了Au‑janusAg@AuNPs，通过自组装制备FePDA与Au‑janusAg@AuNPs复合物（FePDA‑Au‑janusAg@AuNPs），该复合物与丙烯酰胺适配体孵育制得FePDA‑Au‑janusAg@AuNPs‑Apt，其具有的模拟酶及表面增强拉曼散射（SERS）增加的双重活性，在双氧水存在下氧化无色底物3,3',5,5'‑四甲基联苯胺（TMB）为有SERS活性的氧化蓝色oxTMB，而谷胱甘肽（GSH）的加入抑制了TMB的氧化，然后基于GSH和丙烯酰胺（AA）之间的巯基‑烯迈克尔加成反应，AA浓度的增加加速了TMB的氧化，恢复了深蓝色。基于此原理，建立选择性强AA比色‑SERS检测新方法，检出限分别都为0.012µgkg，能够满足国家食品安全的相关要求。

主权项：1.一种FePDA-Au-janusAg@AuNPs结合适配体双模式快速检测丙烯酰胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将20-30mL乙二醇、5-10mL氨水、10-20mL超纯水混合，置于60-70℃水浴中搅拌10-15min，在搅拌下滴入50mgmL的盐酸多巴胺溶液20-40mL，随后再缓慢加入18-20mgmL的硝酸铁溶液25-35mL，60-70℃反应10-12h，反应完成后自然冷却至室温，8000-10000rmin离心5-10min，固体用乙醇和水交替洗涤3-4次，得到FePDA；（2）将0.05molL氯金酸200-300μL加入到50-60mL纯水中，加热至沸腾，加入1molL柠檬酸钠100-150μL，加热煮沸15-20min，自然冷却到室温，得到AuNPs；（3）将1mmolL2-巯基苯并咪唑-5-羧酸MBIA100-150μL，加入5-6mL的AuNPs溶液中，搅拌均匀，在60℃的水浴中孵育2-3h，冷却至室温后，在剧烈搅拌下缓慢滴加10mmolL对苯二酚150-200μL和1mmolLAgNO3150-200μL，摇匀，静置4-5h；得到Au-Ag-JanusNPs；然后在搅拌下加入0.05molL氯金酸20-50μL，滴加0.05molL硼氢化钠水溶液20-50μL，继续搅拌4-5h，得到Au-janusAg@AuNPs；（4）取5mgmLFePDA0.5-1mL分散液与0.5mgmLAu-janusAg@AuNPs2-5mL混合，室温下搅拌12-15h，得FePDA-Au-janusAg@AuNPs纳米酶；（5）取400-500μLFePDA-Au-janusAg@AuNPs与10-15μL丙烯酰胺适配体混合，在37℃下孵育12-15h，制得纳米酶与适配体复合物FePDA-Au-janusAg@AuNPs-Apt；（6）在丙烯酰胺AA标准溶液中加入谷胱甘肽GSH溶液，用0.1molL氢氧化钠溶液调节溶液pH为12、50℃水浴放置40-60min，获得GSH-AA反应物，加入pH4的醋酸盐缓冲溶液、然后加入FePDA-Au-janusAg@AuNPs-Apt、TMB溶液及H2O2，放置5-10min，生成蓝色oxTMB，然后分别使用便携式拉曼仪及紫外光度计对混合物进行拉曼光谱及吸光度检测，根据oxTMB分子结构和拉曼峰位归属，确定1609cm-1处的特征峰及654nm波长作为表面增强拉曼散射光谱及光度法检测AA的判别依据，并确定AA浓度与特征峰的峰面积及吸光度的线性关系；（7）取被测AA的待测样品液与步骤（6）相同的方法进行样品中AA的测定。

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