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申请/专利权人：南京工业大学
摘要：本发明公开了一种利用二价金属离子与组氨酸标签纯化并固定化蛋白的方法及其应用。该方法基于固定化酶的角度，以固定化酶进而提高蛋白的耐受性和重复利用性。其次本发明通过二价金属离子与组氨酸标签的结合实现对蛋白的纯化和固定化，进而提高目标蛋白的酶活。该方法的过程简单，价格低廉，用于含组氨酸标签的蛋白的分离纯化和固定化的操作简单，时间较短，具有很好的应用前景。
主权项：1.一种蛋白粉在催化L-赖氨酸降解上的应用，其特征在于，所述蛋白粉利用二价金属离子与组氨酸标签纯化并固定化蛋白的方法所得，具体包括以下步骤：步骤1，收集培养得到的表达含组氨酸标签的酶的菌株，用pH7.0-7.2的Tris-盐酸缓冲液重悬至20OD后，超声破碎仪破碎，离心去除杂质，得到粗酶液；步骤2，将粗酶液置于Tris-盐酸缓冲液中配置成浓度为1gl的粗酶液，以300rpm搅拌1-2min，加入40mM的钴离子，提高搅拌速度到500rpm搅拌30min，洗涤后，冻干得酶粉，所述含组氨酸标签的酶的菌株为含组氨酸标签的α-碳酸酐酶或含组氨酸标签的L-赖氨酸脱羧酶；步骤3，取步骤2中酶粉溶于去离子水中得0.5gl，加入终浓度为35mgmlPVP溶液，以300rpm搅拌1-2min，加入终浓度为50mM的钴离子和终浓度为200mM的二甲基咪唑，以500rpm搅拌30min，离心，用Tris-Hcl缓冲液洗涤2-3次，使用真空冷冻干燥机进行干燥得到纯化并固定化的蛋白粉。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南京工业大学 一种利用二价金属离子与组氨酸标签纯化并固定化蛋白的方法及其应用
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