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摘要：本发明公开了一种基于液相色谱串联质谱的稳定的溶液内D‑二聚体检测方法。基于液相色谱串联质谱，建立了能够在常规仪器中高灵敏度检测D‑二聚体特征肽段的方法，极大的减少了检测时大分子量多肽吸附效应对检测结果的影响，建立了标准曲线，线性方程为y＝3320.794x‑5486.308，线性相关系数为0.999。本发明还提供了D‑二聚体均匀酶解方案，在0.05‑5μg的质量区间内，溶液内D‑二聚体蛋白质量与酶解后特征交联肽段响应峰面积有良好的线性，线性方程为y＝48233.22x‑3706.92，线性相关系数为0.99。
主权项：1.一种基于液相色谱串联质谱的溶液内D-二聚体检测方法，包括如下步骤：1建立溶液内D-二聚体特征交联肽段的标准曲线：使用含有冰乙酸的牛血清白蛋白酶解液作为肽段上样缓冲液配制不同已知浓度的D-二聚体特征交联肽段标准品溶液，使用全塑料样品瓶进行LC-MSMS分析，建立标准曲线y＝3320.794x-5486.308，x表示特征交联肽段浓度，y表示峰面积；2在溶液内加入不同已知质量的D-二聚体蛋白纯品，引入牛血清白蛋白作为蛋白保护剂，变性后胰蛋白酶酶解，酶解结束后加入甲酸和冰乙酸终止反应，离心，收集上清液于全塑料进样瓶中，使用液相色谱串联质谱对上清液中的D-二聚体特征交联肽段进行检测，得到峰面积与D-二聚体蛋白含量的标准曲线，y＝48233.22x-3706.92，x表示D-二聚体蛋白含量，y表示峰面积；3向含待测D-二聚体的溶液引入牛血清白蛋白，变性，采用胰蛋白酶酶解，酶解结束后加入甲酸和冰乙酸终止反应，离心，收集上清液于全塑料进样瓶中，进行LC-MSMS检测，根据步骤2中标准曲线，得到溶液中D-二聚体含量。
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百度查询： 中国计量科学研究院 一种基于液相色谱串联质谱的稳定的溶液内D-二聚体检测方法
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