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摘要：本发明公开了一种柔性脂质体，具体为干细胞培养上清液柔性脂质体制备及其在皮肤年轻态化妆品上的应用。本发明通过培养羊骨髓间充质干细胞，得到间质干细胞上清液，制备成干细胞脂质体。同时在脂质体的制备过程丁基间苯二酚与白藜芦醇复配维生素E溶液，可以有效抑制黑色素沉积，改善面色晦黯，达到靓肤的效果，由于干细胞的分化特性还可以达到很好的祛皱效果。总之本发明具有优良的祛斑祛皱的效果。
主权项：1.干细胞培养上清液柔性脂质体制备方法，主要由干细胞上清液和多种中药提取物自组装组成，其特征在于：具体制备方法如下：S1、干细胞MSCs的活化与培养：从液氮或-80℃冰箱中取出冻存的羊骨髓间充质干细胞，快速将冻存管放入37℃水浴中迅速解冻，将解冻后的细胞转移到含有其5-10倍体积的预热培养基的离心管中，即含体积分数20%胎牛血清、100UmL链青霉素的LG-DMEM培养基；在1200-1500rmin下离心5min，然后用含体积分数20%胎牛血清、100UmL链青霉素的LG-DMEM培养基重悬细胞，以约4×106的细胞密度将细胞接种至T25培养瓶中，于37℃、5%CO2培养箱中培养，培养72h后，首次全量换液，此后每3d换液一次，直至原代细胞融合度达到80%~90%时，用0.25%胰酶消化，按1:3传代；S2、干细胞MSCs上清液的提取：取生长状况良好的第4代MSCs，以1×106个细胞的密度接种至T25胞瓶中，待细胞融合度达到50%时，PBS洗3次，加入无胎牛血清的LG-DMEM培养基，再加入白藜芦醇的甘油溶液在37℃、5%CO2培养箱中继续培养，24h后4℃下1000g离心10min，收集细胞上清液；S3、干细胞上清液脂质体的制备：称取70-90mg卵磷脂和30-50mg胆固醇，加入10-20ml无水乙醇，待两者溶解，加入步骤S2中的到的干细胞上清液100-200ml及丁基间苯二酚与白藜芦醇复配的维生素E溶液15-30ml，超声，得到均一的乳液，40℃去除乙醇胶态后加入80-100ml的pH为7的PBS缓冲溶液，再蒸发到原体积的12，得到干细胞脂质体粗悬液，超声处理2min，即得到分散较好的干细胞上清液脂质体。
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百度查询： 小草生物科技有限公司 干细胞培养上清液柔性脂质体、制备方法及其在皮肤年轻态产品上的应用
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