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摘要：本发明公开了一种基于氨基酸的溶藻弧菌代谢组学中野生型强毒株与AphA基因缺失型弱菌株的判别方法。利用溶藻弧菌中天冬酰胺和半胱氨酸含量的比值对代谢组学研究中溶藻弧菌低细胞密度下群体感应的调控因子AphA强毒株和弱毒株进行判别，待测样品中天冬酰胺和半胱氨酸的比值在1.5以上的为溶藻弧菌AphA基因缺失型弱毒株，天冬酰胺和半胱氨酸的比值在1.0以下的为溶藻弧菌野生型强毒菌株。本发明操作简单，检测速度快，结果可靠，可为溶藻弧菌低细胞密度下群体感应的调控因子AphA代谢特征分析及相关溶藻弧菌低细胞密度下群体感应的调控因子AphA代谢组学研究提供借鉴。
主权项：1.基于氨基酸的溶藻弧菌代谢组学中野生型强毒株与AphA基因缺失型弱菌株的判别方法，其特征在于：通过代谢组学研究，检测溶藻弧菌中天冬酰胺和半胱氨酸的含量，计算其比值，天冬酰胺和半胱氨酸的比值在1.5以上的为溶藻弧菌AphA基因缺失型弱毒株，天冬酰胺和半胱氨酸的比值在1.0以下的为溶藻弧菌野生型强毒株；所述的溶藻弧菌野生型强毒株是溶藻弧菌菌株EPGS02040，菌种保藏号CCTCCNo.AB209306；所述溶藻弧菌AphA基因缺失型弱毒株为溶藻弧菌菌株的减毒菌株，缺失了所述的溶藻弧菌野生型强毒株中与群体感应系统相关的调控因子AphA；所述检测溶藻弧菌中天冬酰胺和半胱氨酸的含量的具体方法为：首先制备溶藻弧菌样品提取液，然后采用三重四极杆型气相色谱质谱GC-MS联用技术的代谢组学分析方法对溶藻弧菌样品中天冬酰胺和半胱氨酸进行相对定量分析；所述溶藻弧菌样品提取液的制备方法为：分别称取20mg菌粉，加入1.5mL体积分数80%的甲醇水提取溶液中，涡旋10min以提取代谢物，在4℃下，以14000rpm转速离心10min，各取上清液500μL冷冻干燥；在冻干样品中加入60μL的甲氧胺盐酸盐-吡啶溶液，浓度为20mgmL，涡旋至无颗粒残留，在37℃水浴锅孵育90min；第二步进行硅烷化反应，在反应液中加入30μLMSTFA，涡旋后离心，37℃水浴继续衍生60min，衍生化后的样品在14000rpm下离心10min；取上清液置于进样瓶，用于气相色谱质谱GC-MS的分析。
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百度查询： 陕西科技大学 基于氨基酸的溶藻弧菌代谢组学中野生型强毒株与AphA基因缺失型弱菌株的判别方法
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