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摘要:本发明涉及生物检测技术领域,尤其涉及一种鸭坦布苏病毒检测试剂盒及应用。本发明以NS1蛋白作为鸭坦布苏病毒检测试剂盒中的包被抗原,利用NS1蛋白的主要产生时机NS1蛋白是病毒感染细胞时产生的,可以区分自然感染和灭活苗免疫产生的抗体。同时,鸭坦布苏病毒感染初期可检测到NS1蛋白,提示NS1蛋白与病毒的早期感染有关,在感染初期就能利用NS1蛋白准确地检测鸭坦布苏病毒病。本发明提供的NS1蛋白在化学发光ELISA抗体检测试剂盒中的应用,具有准确性高、敏感性高、特异性强、检测效率高等优点,对预防和控制鸭坦布苏病的发生和流行具有重要意义。
主权项:1.化学发光ELISA抗体检测试剂盒,其特征在于,包括包被液、抗原包被板、酶标单抗、样品稀释液、阳性对照血清、阴性对照血清、发光底物、洗涤液和校准品;所述包被液以pH值为9.2-9.8的碳酸盐缓冲液为基础溶剂,添加的抗原为0.09-0.11μgml的NS1蛋白;所述NS1蛋白由SEQIDNO.1所示核苷酸序列的基因通过酵母表达系统表达得到,所述酵母表达系统由PmeI线性化阳性重组表达质粒经电转化法转化至毕赤酵母X-33中得到;所述酶标单抗为HRP酶标单抗,稀释倍数为1:2000;所述样品稀释液为含有酪蛋白和Tween-20的磷酸盐缓冲液;以磷酸盐缓冲液的体积为100vol%计,酪蛋白的含量为0.4-0.6vol%,Tween-20的含量为0.4-0.6vol%;所述发光底物包括发光底物A和发光底物B;所述发光底物A以pH值为7.5-8.5、浓度为0.04-0.06molL的Tris缓冲液为基础溶剂,添加0.08-0.12mmolL的鲁米诺和0.08-0.12gL的羟基香豆素;所述发光底物B以pH值为5.0-5.5、浓度为0.04-0.06molL的醋酸铵溶液为基础溶剂,添加0.06-0.08mmolL的维生素C和2.7-3.3mmolL的氨基酸氧化酶;所述洗涤液以10倍浓缩计,包括0.018-0.022molL的磷酸二氢钠、0.07-0.09molL的磷酸氢二钠、1.29-1.45molL的氯化钠和0.4-0.6vol%的Tween-20;所述洗涤液以10倍浓缩计,pH值为7.3-7.5;所述化学发光ELISA抗体检测试剂盒的检测方法包括如下步骤:S1、将待测样品、校准品分别与酶标单抗混合均匀,加入包被板中,反应;S2、洗涤液洗涤步骤S1所述反应后的包被板,加入发光底物,用化学发光免疫分析检测仪器检测发光值;S3、根据步骤S3得到的发光值,通过校准曲线拟合计算,得出待测样品中的抗体剂量;S4、根据步骤S4得到的抗体剂量,判断检测样品中是否含有鸭坦布苏病毒;步骤S4所述判断的方法包括:若抗体剂量值<40,判定样品为抗体阴性;若抗体剂量值≥40,判定样品为抗体阳性。
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