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摘要：本发明涉及基于益生菌与集胞藻形成聚集体构建的的益生菌递送系统的制备方法及应用，可有效解决各种生理挑战导致的益生菌口服过胃后失活或者活性降低，进而导致的肠道低定植效率的难题，促进益生菌的生长和增殖，恢复和重建肠道屏障，调节肠道菌群，实现对结肠炎的有效防治。培养益生菌和集胞藻，通过阳离子聚电解质聚二烯丙基二甲基氯化胺PDADMAC对集胞藻进行仿生硅化修饰，然后将枯草芽孢杆菌及修饰后的集胞藻先后重悬于硅酸钠溶液中共孵育，集胞藻细胞在自发聚集过程中即可以将益生菌细胞包裹起来，制备得到粒径均一，性质稳定的益生菌‑集胞藻聚集体，本发明显著促进益生菌的定殖、生长和繁殖，恢复和重建肠道屏障，调节肠道菌群。

主权项：1.一种用于口服益生菌递送的益生菌-集胞藻聚集体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）培养益生菌：将益生菌冻干粉接种在营养肉汤液体培养基中，置于37～38℃的恒温培养箱中，在震荡速度为180～200rmin的条件下进行培养，当增殖至对数生长期时，收集菌液，备用；所述的益生菌为枯草芽孢杆菌、大肠埃希氏菌或罗伊氏乳杆菌；所述的营养肉汤液体培养基：0.3g牛肉膏、1g蛋白胨和0.5gNaCl溶于90mL蒸馏水，调pH至7.0～7.4，定容至100mL，121℃灭菌30min，冷却至室温；（2）培养集胞藻：将集胞藻藻种接种在液体培养基中，置于25～30℃的恒温光照培养箱中，在12h光照、12h黑暗模拟昼夜交替的条件下进行培养，当集胞藻增殖至对数期时，收集藻液，备用；所述的液体培养基：15gNaNO3，2gK2HPO4，3.75gMgSO4·7H2O，1.8gCaCl2·2H2O，0.3g柠檬酸，0.3g柠檬酸铁胺，0.05gEDTANa2，1gNa2CO3，0.286gH3BO3，0.186gMnCl2·4H2O，0.022gZnSO4·7H2O，0.039gNa2Mo4.2H2O，0.008gCuSO4.5H2O，0.005gCoNO32.6H2O溶于50L超纯水中，以0.22微米滤膜过滤除菌，即得培养基；（3）制备仿生修饰的集胞藻SP-PDADMAC：取5～15mL步骤（2）得到的集胞藻藻液，藻细胞浓度为OD680=0.8～1，5000g离心5～10min，收集沉淀，使用5～20mLNaCl溶液洗涤3次以去除残余培养基，得集胞藻细胞；集胞藻细胞表面为负电性，可被正电修饰，阳离子聚电解质聚二烯丙基二甲基氯化胺PDADMAC分子中含有带正电荷的四级胺，修饰在集胞藻表面对其进行改性；取集胞藻细胞，以5～50mlPDADMAC溶液重悬，置于培养箱中，在震荡速度为80～100rmin的条件下孵育30～60min，使PDADMAC在集胞藻细胞表面充分吸附，5000g离心5～10min，收集沉淀，并以超纯水洗涤，重悬至1～2mL，得仿生修饰的集胞藻SP-PDADMAC；所述的NaCl溶液：取0.9gNaCl溶于100mL超纯水中，充分混匀后得到0.9%的NaCl溶液；所述的PDADMAC溶液：重量浓度20%的PDADMAC1～5mL溶于245mL无菌生理盐水中，充分混匀，得1gL的PDADMAC溶液；（4）益生菌-集胞藻聚集体ASP@BS的制备：取1～3mL步骤（1）得到的益生菌菌液，菌液浓度OD600=0.8～1，5000g离心5～10min，收集沉淀，使用5～20mLNaCl溶液洗涤3次，以去除残余培养基，得益生菌细胞；将得到的益生菌细胞重悬于5～20mL硅酸钠溶液中，随后将步骤（3）得到的仿生修饰的集胞藻SP-PDADMAC溶液逐滴加入硅酸钠溶液中，置于圆底烧瓶中，以磁力搅拌器搅拌30～60min得益生菌-集胞藻聚集体；所述的硅酸钠溶液：取5～20mgNa2SiO3溶于9mLPBS磷酸盐缓冲液中，并以0.1M的HCl溶液调至PH=7～7.4，定容至10mL制成。

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百度查询： 郑州大学 一种用于口服益生菌递送的益生菌-集胞藻聚集体的制备方法及其应用