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摘要：本发明公开了一种血液中肾病综合征差异标志物的纯化及质谱鉴定方法。用甲醇法提取代谢产物后，使用NexeraX2LC‑30AD超高效液相系统和SCIEXQTRAP6500+的LC‑MS系统进行分析，利用液相色谱和质谱将其区分。MS技术提供了检测和量化大量代谢物的能力。本发明方法优化了血液中肾病综合征差异标志物纯化及质谱鉴定，利用质谱法鉴定血液中差异标志物甘露醇、山梨醇、半乳糖醇、NAD、NADPH、胆红素的结构，使难以区分的差异标志物得以区分。本发明所用的血液中肾病综合征差异标志物纯化及质谱鉴定的方法简便易行，实验用量少，稳定性好，且快速、准确，可以弥补目前血液差异标志物寻找的不足。

主权项：1.一种血液中肾病综合征差异标志物的纯化及质谱鉴定方法，其特征在于，通过以下步骤实现：（1）甲醇法提取肾病综合征患者血液中的所有代谢物，用HPLC级甲醇提取血清样本，在真空旋干仪中旋干，测定前用复溶体系重新溶解，离心后取上清上液相质谱分析系统；（2）选择日本岛津的NexeraX2LC-30AD超高效液相系统和SCIEXQTRAP6500+的LC-MS系统进行分析，色谱柱为WatersAtlantisTMPremierBEHZ-HILIC柱，2.1×100mm，1.7μm；其中色谱条件下，各标志物的出峰时间如下所示：3.70min烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、4.24min还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、14.10min甘露醇、13.10min山梨醇、14.80min半乳糖醇、1.50min胆红素；（3）根据标志物的理化性质选择合适的离子模式进行检测，正离子模式：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸或负离子模式：甘露醇、山梨醇、半乳糖醇、胆红素；设置标准品为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、甘露醇、山梨醇、半乳糖醇、胆红素，浓度梯度为0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、5、10、20、50、100、200、500、1000ngmL；（4）根据质谱结果，设置流动相，使甘露醇、山梨醇、半乳糖醇三种糖物质同分异构体得以区分；设置的流动相为20mM乙酸铵、0.2%NH3·H2O的9:1乙腈水A和20mM乙酸铵、0.2%NH3·H2O的水溶液B组成；流速为0.3mlmin；（5）更换洗脱梯度时间，直到6个标志物都能被准确区分开；梯度洗脱为0-8min，0%B；8-15min，0%B-5%B；15-20min，5%B-55%B；20-22min，55%B；22-22.1min，55%B-0%B；22.1-27min，0%B。

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